產(chǎn)品簡介：

用Pfu DNA聚合酶等高保真DNA聚合酶擴增得到的PCR產(chǎn)物為平末端，直接克隆比較困難。本試劑盒提供了含克隆載體的平末端DNA片段克隆試劑，極大提高了其克隆效率。

產(chǎn)品特點：

1.基于T4 DNA連接酶的平末端克隆。

2.優(yōu)化的連接體系，極大降低載體自連。

3.使用藍白斑篩選，一般95%以上的白轉(zhuǎn)化子都是帶有DNA插入片段的重組子。

4.可用于克隆高保真DNA聚合酶如Pfu、Pwo、DeepVent等DNA聚合酶擴增得到的PCR產(chǎn)物；也可以用于克隆一些產(chǎn)生平末端的限制性內(nèi)切酶如EcoRV和SmaI等酶酶切產(chǎn)生的DNA片段；還可用于克隆由粘端DNA用DNA聚合酶補平 后的得到的平末端DNA片段。

5.本產(chǎn)品足夠20次的10?L體系的平末端克隆。

6.平末端克隆試劑盒只可用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

超純水1 mL1.5 mL 藍蓋管

平末端克隆 B 載體20 次0.5 mL 黃蓋管

10×平末端克隆緩沖液20 ?L0.5 mL 綠蓋管

T4 DNA 連接酶，5U/ ?L

20 ?L0.5 mL 紅蓋管

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

平末端 DNA 片段、大腸桿菌感受態(tài)細胞。

使用方法：

1. 按下表設置連接反應體系。注意：首-次使用本產(chǎn)品時需要在平末端克隆 B 載體干粉管中加入 22 ?L 的超純水，渦旋震蕩 30 秒溶解，短暫離心后即可使用。沒有用完的平末端克隆B 載體溶液需要放-20℃保存：

成份用量

純化后的平末端 DNA 片段10 ng

10×平末端克隆緩沖液1 ?L

平末端克隆 B 載體溶液1 ?L

T4 DNA 連接酶，5U/ ?L

1 ?L

補超純水到10 ?L

2. 37℃保溫，60 分鐘。

3. 連接產(chǎn)物可直接用于后續(xù)轉(zhuǎn)化自備的大腸桿菌感受態(tài)細胞，37℃過夜培養(yǎng)。注意：本產(chǎn)品使用的 B 載體是 Amp 抗性，故需要涂盤在含 Amp 的LB 培養(yǎng)基上篩選重組子，同時還需要在 LB 培養(yǎng)基中加入終濃度是 40 ?g/m 的 LX-gal 和終濃度是 24 ?g/mL 的 IPTG，這樣可以通過藍白斑篩選來降低假陽性率到 5%以下。白斑是重組子，藍斑是非重組子。

選擇我們的平末端克隆試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！