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目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>試劑盒>> 質(zhì)粒 DNA 大量純化試劑盒(過柱法)

質(zhì)粒 DNA 大量純化試劑盒(過柱法)
  • 質(zhì)粒 DNA 大量純化試劑盒(過柱法)
參考價 500
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
500
≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 烜雅生物
  • 型號
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2025-05-20 09:55:18瀏覽次數(shù):68評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5次
貨號 XY-D-1877 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 科研 英文名稱 Column Max Plasmid DNA Purification Kit
保存條件 -20℃ 有效期 1年
質(zhì)粒 DNA 大量純化試劑盒(過柱法)產(chǎn)量高,每毫升過夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到 2-5 ug/mL。

產(chǎn)品簡介:

本試劑盒是用于質(zhì)粒 DNA 大量制備與純化的試劑盒。菌體先經(jīng)堿裂解法處理,再通過離心吸附柱,專一結(jié)合 DNA,最后洗去雜質(zhì),高效快速提取質(zhì)粒 DNA, 全套操作可以在 30 分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從 50-100 mL 過夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá) 300-500 ug 的高純度質(zhì)粒DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0),可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測序及 PCR 等。


產(chǎn)品特點:

1.快速、步驟少,整個操作在半個小時之內(nèi)完成。

2.純度高,采用本試劑盒提取的質(zhì)粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間。

3.產(chǎn)量高,每毫升過夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到 2-5 ug/mL。

4.用途廣,適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。

5.本產(chǎn)品足夠 5 次質(zhì)粒 DNA 大量純化。

6.質(zhì)粒 DNA 大量純化試劑盒(過柱法)只可用于科研。


產(chǎn)品參數(shù):

成份規(guī)格包裝

質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 A26 mL30 mL 本色瓶

質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 B26 mL30 mL 本色瓶

質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 C36 mL60 mL 本色瓶

RNase A 溶液(10mg/mL)0.6 mL1.5 mL 本色管

DNA 離心吸附柱(大提)

5 套塑料袋

通用洗柱液100 mL120 mL 本色瓶

DNA 洗脫液(基因組純化專用)10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊1 份

運輸及保存

常溫運輸和保存,其中 RNase A 溶液需要低溫運輸、-20℃保存,有效期一年。

自備試劑

50 mL 塑料離心管


使用方法:

1.用 250 mL 離心管收集 100-300 mL 菌液,5000 rpm 離心 10 分鐘,去除上清。

2.往細(xì)菌沉淀中加入 5 mL 質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 A,充分振蕩懸浮(第一次使用時需要將 RNase A 溶液全部加入到溶液 A 中并混合均勻,未用完的、含RNase A 的溶液 A 需放 4℃保存)。注意:充分重懸細(xì)胞沉淀使之無細(xì)胞結(jié)塊狀物對于獲得高的質(zhì)粒產(chǎn)量十分重要。

3.加入 5 mL 質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 B,溫和翻轉(zhuǎn) 10 余次至藍(lán)色變得均勻。

室溫放置 5-10 分鐘裂解細(xì)菌。注意:避免劇烈振蕩,否則細(xì)菌基因組 DNA

 

將斷裂為小片段,與質(zhì)粒難以分離,污染質(zhì)粒 DNA。質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放,否則空氣中的二氧化碳會進(jìn)入溶液,形成碳酸, 中和質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 B 中的堿,降低其效率。如果質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 B 顏色不是藍(lán)色,則表示變質(zhì),應(yīng)該棄之不用并且速跟廠家聯(lián)系。

4.加入冰浴的 7 mL 質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 C,顛倒混勻,此時混合液應(yīng)該從藍(lán)色變成無色,如果不發(fā)生顏色變化,則表示質(zhì)粒 DNA 大量純化溶液 C 變質(zhì),需要聯(lián)系廠家。將混合液冰上放置 10 分鐘,將有白色絮狀物形成。注意不要過分振蕩。

5.6000 rpm 離心 10 分鐘。如果離心管承受能力強,離心速度還可以適當(dāng)提高以充分沉淀絮狀物。

6.將上清液(約 20 mL)轉(zhuǎn)移到 DNA 離心吸附柱(大提)中,放入 50 mL 套管中。由于此時的溶液比重較大,部分沉淀物懸浮在上清液中屬正常,吸取上清時避開漂浮的沉淀物即可。

7.6000 rpm 離心 5 分鐘,質(zhì)粒 DNA 將與 DNA 離心吸附柱(大提)中的膜結(jié)合,棄穿透液。

8.將 10 mL 通用洗柱液加入到 DNA 離心吸附柱(大提)中,室溫靜置 2 分鐘后 6000 rpm 離心 5 分鐘,棄穿透液。

9.重復(fù)上步一次,即將 10 mL 通用洗柱液加入到 DNA 離心吸附柱(大提)中, 室溫靜置 2 分鐘后 6000 rpm 離心 5 分鐘,棄穿透液。

10.室溫 6000 rpm 空甩 5 分鐘,棄穿透液。注意:此步對去除殘留通用洗柱液很重要,否則通用洗柱液會影響 DNA 的使用。

11.將 DNA 離心吸附柱(大提)放入一個自備的、干凈的 50 mL 塑料離心管中, 加 0.5 mL DNA 洗脫液(洗脫液如加熱到 50-65℃效果更佳),室溫靜置 2 分鐘后 6000rpm 離心 5 分鐘,收集液即是質(zhì)粒 DNA 溶液。

12.本試劑盒中的離心吸附柱吸附能力較強,所以再用 1 mL DNA 洗脫液洗脫3-4 次才能把絕大部分質(zhì)粒 DNA 洗脫下來。得到的 DNA 可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注:如果 DNA 洗脫液不夠,可以用自備的 DEPC 水代替。注:一般情況下,第一次洗脫可以洗脫約 25%的質(zhì)粒 DNA;第二次洗脫可以洗脫約 35%的質(zhì)粒 DNA;第三次洗脫可以洗脫約 20%的質(zhì)粒DNA;第四次洗脫可以洗脫約 10%的質(zhì)粒 DNA;第五次洗脫可以洗脫約 8% 的質(zhì)粒 DNA。

13.合并所得質(zhì)粒 DNA,立即使用或-20℃儲存。如果需要使用液相內(nèi)毒素清除劑清除質(zhì)粒 DNA 中的內(nèi)毒素,可以直接將此步所得的 DNA 溶液用于去內(nèi)毒素處理。如果 DNA 濃度太低,可以另購本公司的核酸濃縮劑進(jìn)行濃縮。

選擇我們的質(zhì)粒 DNA 大量純化試劑盒(過柱法),就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護(hù)航!

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