低溫保存、冷凍干燥對程序降溫的要求
低溫一般是指0℃左右,深低溫一般指低于-80℃以下,在低溫環(huán)境中,生物體的新陳代謝會隨著溫度的降低而延緩。在0℃以上時,這種延緩是可逆的,隨著溫度升高,新陳代謝還回逐步恢復,但降至0℃以下時,這種延緩會受到不可逆的損傷。因為新陳代謝一般發(fā)生在水溶液或和水溶液之上進行,而冰點以下的水會形成硬度較高的冰晶,并且會使細胞內的水分丟失而形成細胞脫水。
所以不同的細胞要求利用不同的降溫程序,一些復雜的細胞還需要多段降溫。降溫方法多樣,例如利用冰箱進行兩步法降溫,和利用液氮容器內氣象區(qū)的溫度梯度手控降溫。
在設計和選用降溫儀時需要全面考慮到產品需求,例如數量、形狀等,同時需要考慮降溫儀的降溫速率、溫控范圍等,另外還要考慮到經濟性和實用性,綜合評價下選用方案。
(1)工作溫度范圍:一般情況下降溫儀的溫控范圍是室溫至-60℃,溫度則根據實際工作需要決定。
(2)溫控速率:經過數十年的反復研究,學者們發(fā)現越低的降溫速率越能實現對于復雜結構的細胞降溫需求,而所謂的“超慢速冷卻”則需要降溫儀能夠達到0.001℃/min的速度。另外個別需要急速冷凍的工作需要,則可以直接選擇液氮冷凍的方式進行。
(3)控制精度:降溫過程中的控制精度包括兩個方面:降溫速率的精度控制和溫度值的精度控制。實踐中認為誤差在5%之內是可以被接受的。嚴格來說,一般控制在±0.2℃的精度控制內是可以被允許的。
(4)冷源的選擇:在實際工作中,一般情況下使用價格較低的固態(tài)二氧化碳和液氮用來作為冷源。當華點高于-78℃時,一般選用固態(tài)二氧化碳,而需要更低溫度時則選用液氮,目前大多數降溫儀選用的冷源是液氮。
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