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人 CD4+ T細胞陰性分選試劑盒

MCE 國際站：Human CD4⁺ T Cells Negative Selection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-K0352

存儲條件：4℃，2 年 磁珠禁止凍結(jié)

產(chǎn)品活性：MCE 人 CD4+ T 細胞陰性分選試劑盒可從人外周血單個核細胞 (PBMC) 中分離出 CD4+ T 細胞。

描述及優(yōu)勢：MCE 人 CD4+ 細胞陰性分選試劑盒可從人外周血單個核細胞 (PBMC) 中分離出 CD4+ T 細胞。原理為生物素 (Biotin) 標記的單克隆抗體對非目標細胞（非 CD4+ T 細胞）進行標記，再通過鏈霉親和素 (Streptavidin) 標記的磁珠對非目標細胞進行去除，從而達到人 CD4+ T 細胞分選的目的。 本試劑盒操作簡單，各成分對細胞均無毒性，且可實現(xiàn)高純度細胞分離的目的，適用于從新鮮分離或凍存的人外周血單個核細胞 (PBMC) 中分選出 CD4+ T 細胞。分離的細胞可用于下游應(yīng)用，如流式細胞術(shù)、細胞培養(yǎng)、Western blot 分析、免疫沉淀、報告基因檢測或 DNA/RNA 提取等。 MCE 人 CD4+ T 細胞陰性分選試劑盒具有如下優(yōu)點 1. 簡單快速：30 min 即可分選得到目的細胞； 2. 無需分離柱：使用磁性分離器即可實現(xiàn)目的細胞的快速分離； 3. 高純度：分選細胞純度可達 95%； 4. 高活性：分選后細胞無抗體和磁珠標記，活性高且功能良好可用于下游實驗。

操作流程：1. 磁珠準備：充分重懸鏈霉親和素磁珠，取 20 μL 至 1.5 mL EP 管中，加入 1 mL 分選緩沖液，10,000 × g 離心 1 min，棄上清。重復(fù)洗滌磁珠 1 - 2 次，加 20 μL 分選緩沖液重懸磁珠。 注：最后磁珠重懸分選緩沖液的用量與初始吸取磁珠體積需一致。 2. 制備人外周血單核細胞 (PBMC) 懸液：通過 Ficoll 密度梯度離心法從人外周血中分離并收集 PBMC，PBS 洗滌細胞并離心。將 PBMC 重懸于分選緩沖液中，調(diào)整細胞密度為 1×108 cells/mL。 3. 抗體標記：取 100 μL 細胞懸液（1 × 107 個細胞）加入無菌流式管底部，再加入 2 μL 生物素化抗體預(yù)混液，混勻后 4°C 孵育 15 min。 注：a. 細胞懸液直接加入流式管底部，避免沿管壁加入。 b. 如果分選更多細胞，可按比例增加生物素化抗體預(yù)混液的用量。 4. 細胞洗滌：細胞-抗體孵育完成后，用 10 倍體積分選緩沖液洗滌細胞 1 次，500 g 離心 5 min，棄上清。 5. 磁珠標記：離心完成后用 100 μL 分選緩沖液重懸細胞，加入 20 μL 清洗過的磁珠，混勻后 4°C 孵育 10 min。 注：如果分選更多細胞，則按比例增加磁珠用量。例如分選 5 × 107 個細胞，在 500 μL 細胞懸液中加入 10 μL 抗體預(yù)混液和 100 μL 磁珠。如果分選少于 1 × 107 個細胞，則將細胞懸液體積補至 100 μL，加入 2 μL 抗體預(yù)混液和 20 μL 磁珠。 6. 洗滌：孵育完成后，在流式管中加入 2.5 mL 分選緩沖液，用移液器輕柔吹吸混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻）。 7. 分選：將含有細胞的分選流式管置于磁性分離器上，磁性分離 5 min。 8. 收集細胞：將細胞懸液輕柔倒入一個無菌離心管中（傾倒過程中流式管不可脫離磁性分離器），此細胞懸液中即包含純化的小鼠中性粒細胞，500 × g 離心 5 min。離心后棄上清，收集細胞。 9. 根據(jù)實驗需要洗滌細胞，將細胞重懸于所需緩沖液或培養(yǎng)基中，即可用于后續(xù)分子生物學(xué)或細胞生物學(xué)實驗。 注：如需進一步提高細胞的純度，可將細胞懸液 500 g 離心 5 min，棄上清并用 100 μL 分選緩沖液重懸細胞，參考如上步驟進行二次純化，二次純化細胞純度可提高 2% - 4%。

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