美國蘭博LBA800氨基酸分析儀檢測牛乳中非法添加的大豆蛋白

    隨著鮮牛乳的消費量迅速增加，在純牛乳中非法添加大豆蛋白以提高蛋白質含量從而獲得較高的經(jīng)濟效益，不僅降低了牛乳的營養(yǎng)價值，也嚴重損害了廣大消費者的利益。因此，檢測原料乳中摻入大豆蛋白對原料乳的質量控制有重要意義。

    目前的乳品蛋白質摻假檢測方法涉及了色譜、質譜、免疫、聚合酶鏈式反應、電泳、光譜學、分析化學等技術領域。

    利用傳統(tǒng)的化學檢測方法檢測牛乳中的大豆蛋白，簡單快速但只能定性不利于蛋白的定量檢測。

    通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳中牛乳和大豆蛋白的條帶對比可檢測摻假量體積分數(shù)5%的豆?jié){，凝膠電泳耗時較長且檢出限較低。

    利用近紅外光譜法、液相色譜法以及聚合酶鏈式反應等結合化學測定方法或質譜法可以定性定量檢測牛乳中的大豆蛋白，但是檢測成本較高。

    美國蘭博天津應用研發(fā)中心使用氨基酸分析儀，利用牛乳和大豆蛋白質的氨基酸組成含量差異對牛乳中摻入的大豆蛋白進行定性定量檢測，彌補了現(xiàn)有方法耗時長檢測不靈敏的不足。

儀器與設備

LBA800型氨基酸分析儀及數(shù)據(jù)處理平臺—美國蘭博公司；

KQ-250B型超聲波清洗器

凱氏定氮裝置

高速冷凍離心機

均質儀等

樣品處理

取2.5 mL液體樣品（0.100 g固體樣品）于水解管中加10 mL 6 mol/L鹽酸滴入正辛醇充氮后封管置于110 ℃烘箱中保持24 h，冷卻后經(jīng)濾紙過濾到50 mL容量瓶中用超純水反復沖洗水解管及濾紙zui后定容。取 1 mL的樣液于蒸發(fā)皿中在蒸氣浴上蒸干，然后加0.02 mol/L鹽酸2.5 mL溶解用針管過濾器過濾，備用上機。

色譜條件

熒光激發(fā)波長338 nm；熒光發(fā)射波長425 nm；柱溫62 ℃；反應器35 ℃；進樣量10 μL；流速0.4 mL/min；柱后泵流速0.4 mL/min；流動相配制見表1，梯度洗脫程序見表2。

結果與分析

氨基酸標樣的回歸方程、相關系數(shù)和線性范圍

檢測牛乳中摻入大豆蛋白的方法的建立

摻假牛乳中6 種氨基酸含量與大豆蛋白添加量的關系

假設隨著大豆分離蛋白在牛乳中添加量的增加，天冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、精氨酸在牛乳中的含量也隨之增加。6 種氨基酸含量與大豆蛋白添加量都存在著一定的線性關系。

 利用氨基酸分析儀對牛乳、大豆、摻假樣品中17 種氨基酸進行分析，方法簡單，準確度、重復性和穩(wěn)定性較好。

取自同牧場同品種乳牛的常乳樣品氨基酸圖譜相似，氨基酸組成和比例基本一致；不同廠家的大豆分離蛋白的氨基酸圖譜及含量差別不大，說明實驗具有一定的區(qū)域代表性。不同的牛乳樣品通過模擬摻假實驗，以摻假樣品中的6 種氨基酸（天冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、精氨酸）含量為橫坐標以摻假的大豆分離蛋白占樣品總蛋白的百分比為縱坐標得到線性方程y=0.061x＋6.586，R2=0.889重復性較好，即可通過樣品中特定氨基酸含量和推算出摻入大豆蛋白的比例，從而建立了純牛乳中大豆蛋白摻假的定量檢測方法，且大豆蛋白摻假量在總蛋白含量的1%以上時，此法就可有效地進行檢測，方法簡單，靈敏度高。本研究為牛乳中大豆蛋白的摻假檢測提供了創(chuàng)新方法，對更廣闊區(qū)域內的牛乳和其他類蛋白質摻假還有待進一步的驗證和探索。