色譜泵是指采用色譜技術(shù)制備純物質(zhì)，即，分離、收集一種或多種色譜純物質(zhì)。制備色譜中的“制備”這一概念指獲得足夠量的單一化合物，以滿足研究和其它用途。制備色譜的出現(xiàn)，使色譜技術(shù)與經(jīng)濟(jì)利益建立了聯(lián)系。制備量大小和成本高低是制備色譜的兩個(gè)重要指標(biāo)。其中，色譜泵主要用于石油化工產(chǎn)品和揮發(fā)性天然產(chǎn)物的色譜純樣品制備。

 

　　色譜泵到底是什么？

 

　?。?）分析色譜的目的：

 

　　分析出混合物中一（或者，幾個(gè)）純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì)。為了加快分離的時(shí)間與提高分離的效率，制備色譜的的進(jìn)樣品量很大，導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大，也就必須加譜柱填料，增大制備色譜的直徑和長(zhǎng)度，使用的相對(duì)多的流動(dòng)相。然而，當(dāng)色譜柱上樣品負(fù)載加大的時(shí)候，往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。制備色譜，要解決容量與柱子效果之間的矛盾，對(duì)重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟(jì)上來(lái)說(shuō)。制備色譜要爭(zhēng)取少用填料，少用溶劑，要盡可能多的得到產(chǎn)品。

 

　?。?）樣品的前處理

 

　　制備色譜柱子由于處理的樣品多，比分析柱子容易受污染，所以，必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過(guò)濾、結(jié)晶、固相萃取等簡(jiǎn)單的分離方法，如果用得上，而且還不是很麻煩，就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。

 

　?。?）制備色譜柱的材質(zhì)及其特點(diǎn)

 

　　下面介紹一下，色譜泵常用的材質(zhì)及其特點(diǎn)：

 

　　各種規(guī)格的玻璃柱子在實(shí)驗(yàn)室里頭很容易得到，而且價(jià)格低廉，但玻璃柱子致命的弱點(diǎn)是它能承受的壓力很小，且非常容易破碎。當(dāng)由于壓力太小而導(dǎo)致流動(dòng)相流速很慢的時(shí)候，高位液面或加高壓空氣（或氮?dú)猓┑牟捎檬且粋€(gè)簡(jiǎn)單的解決辦法。在底下加真空，也能在一定程度上解決個(gè)問(wèn)題。

 

　　不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能，但其價(jià)格相對(duì)很貴。如果，只有很小的分離任務(wù)且經(jīng)費(fèi)也允許，市面上直徑為1cm的小型制備柱。

 

　　有機(jī)玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕，相對(duì)不銹鋼柱子而言，它是半透明的，可以看到液體的運(yùn)行狀態(tài)，對(duì)有色的物質(zhì)其特點(diǎn)就更為突出。

 

　?。?）固定相的選擇

 

　　硅膠、鍵合固定相（如，C18）、離子交換樹(shù)脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。有不少文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果，如，對(duì)硅膠進(jìn)行的硝酸銀（或緩沖液）處理。

 

　　各種類型的色譜泵有不同的操作方法。可以參照各自的操作手冊(cè)?，F(xiàn)簡(jiǎn)要介紹如下：

 

　　1、準(zhǔn)備好工具和所需部件。工具包括扳手、10#木螺釘、超聲清洗粉、墊圈安裝工具、新墊圈。用水-甲醇沖洗泵，拆開(kāi)進(jìn)出口管道，在泵頭和單向閥上標(biāo)出液流方向。

 

　　2、將柱塞桿縮至zui小，松開(kāi)色譜泵泵頭的兩根收緊螺絲，小心托住泵頭。操作時(shí)要注意處處以平衡的動(dòng)作慢慢退出泵頭，切不可搖動(dòng)或上下左右擺動(dòng)泵頭，否則柱塞桿極易折斷。退出泵頭后，柱塞桿還留在泵上。

 

　　3、用10#的木螺釘旋進(jìn)就螺釘孔中輕輕撥出舊墊圈，注意不要?jiǎng)澠票妙^。要毫不猶豫的扔掉舊的墊圈。

 

　　4、將色譜泵泵頭和新墊圈分別放入甲醇中超聲清洗，同時(shí)用無(wú)纖維紙擦洗柱塞桿。查看柱塞桿上有無(wú)劃痕，如有劃痕則應(yīng)先更換新的柱塞桿在換新的墊圈。

 

　　5、安上新墊圈。這一步要用專門的安裝工具，切不可粗心大意，避免損壞墊圈。有寫(xiě)公司專門出售安墊圈的工具，有詳細(xì)的說(shuō)明與圖解。選一根略粗于柱塞桿的不銹鋼桿，截成約5厘米長(zhǎng)，一端精密磨制成與柱塞桿同粗細(xì)的、有很高光潔度的面。選一根直徑大于柱塞桿約2mm、壁厚2 mm，長(zhǎng)約3cm，一端截面平整光滑的銅管，操作時(shí)將不銹鋼桿光滑端從墊圈無(wú)彈簧的一側(cè)輕輕插入，插至墊圈不掉下來(lái)即可。將墊圈有彈簧的一側(cè)對(duì)準(zhǔn)泵室，再給不銹鋼桿套上銅管，用光滑的一面輕輕向泵室壓墊圈，同時(shí)抽出不銹鋼桿，繼續(xù)用拇指將墊圈壓入泵頭，加上墊圈。

 

　　6、重新裝上色譜泵泵頭。先在柱塞桿上滴幾滴甲醇以濕潤(rùn)，滑動(dòng)泵頭到位。千萬(wàn)不能搖動(dòng)或擺動(dòng)，以防止柱塞桿在這一步操作時(shí)折斷。平衡地上緊固定螺絲，接上進(jìn)液管道。

 

　　7、zui后，打脫氣的甲醇到泵腔中，不斷用紙巾從泵出口處吸去流動(dòng)液，等無(wú)氣泡溢出時(shí)再接上輸出管道，打開(kāi)泄液閥，繼續(xù)抽20ml甲醇趕走氣泡后，換成需要的流動(dòng)相。

 

　　如果泵被微粒污染，可分別用 25ml 水＋25ml 甲醇＋25ml異丙醇＋25ml 二氯甲烷依次沖洗，再用所用的溶液沖洗整個(gè)系統(tǒng)。注意：沖洗時(shí)應(yīng)打開(kāi)泄液閥。如果氣泡進(jìn)入閥中，色譜泵會(huì)緊貼在閥體的一側(cè)，使寶石球難返回到閥座，引起液體倒流，導(dǎo)致泵的壓力和流速明顯改變。此時(shí)應(yīng)立即打開(kāi)瀉液閥，大流量（2ml/min）沖洗泵，直至排除液為直線型。如果泵進(jìn)氣泡也可在泵頭上排氣泡，具體做法為：用扳手固定住進(jìn)氣泡的泵頭，擰開(kāi)輸出管道的壓帽，手動(dòng)泵進(jìn)液，這時(shí)可見(jiàn)到氣泡從孔中擠壓出來(lái)，直至無(wú)氣泡排出將壓帽擰緊。如果采取上述方法仍不能使壓力穩(wěn)定， 應(yīng)考慮是密封墊圈壞了或單向閥磨損、球不光滑等，需更換部件。

 

　　色譜泵泵墊圈故障

 

　　色譜泵泵墊圈常見(jiàn)的故障是滲漏和墊圈受損污染系統(tǒng)。 液相色譜系統(tǒng)一般情況下不要使用強(qiáng)酸強(qiáng)堿溶液，樣品 PH 值一般調(diào)到中性，才可進(jìn)樣。如果強(qiáng)酸強(qiáng)堿會(huì)損壞密封墊和柱塞桿。密封圈與運(yùn)動(dòng)著的柱塞桿緊密接觸，可使柱塞在泵頭自由運(yùn)動(dòng)而流動(dòng)相不漏出來(lái)，色譜泵是液相色譜中易磨損的部件。有條件的實(shí)驗(yàn)室可三個(gè)月更換一次墊圈， 以防止泵系統(tǒng)污染。如果用緩沖鹽作流動(dòng)相則更會(huì)加速墊圈的磨損，應(yīng)及時(shí)沖洗。墊圈損壞一般表現(xiàn)為：泵壓力不穩(wěn)、泵頭漏液。為避免上述故障的發(fā)生，我們?cè)诜治鲋袘?yīng)注意以下幾點(diǎn)

 

　　1、使用超純水、純度級(jí)別較高的試劑和色譜級(jí)溶劑配制流動(dòng)相；

 

　　2、配好的流動(dòng)相一定要抽濾脫氣，即便儀器有在線脫氣裝置，也在上機(jī)前進(jìn)行抽濾；

 

　　3、色譜泵在啟動(dòng)前一定要通過(guò)泄液閥抽凈泵里的空氣；

 

　　4、用緩沖鹽洗脫時(shí)，分析結(jié)束后一定要用水沖洗泵和整個(gè)流路系統(tǒng)，用有機(jī)溶劑充滿系統(tǒng)。