焦糖色是我國(guó)允許使用的一種食用著色劑，應(yīng)用廣泛，涵蓋食品、釀酒、制藥等多個(gè)領(lǐng)域。

上通常按其生產(chǎn)工藝把焦糖色分為四類：Ⅰ普通焦糖；Ⅱ亞硫酸鉀鈉焦糖；Ⅲ氨焦糖；Ⅳ亞硫酸銨焦糖。我國(guó)GB 2760-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定啤酒中Ⅲ、Ⅳ類焦糖色使用*為50g/L。

Ⅲ、Ⅳ類焦糖色在生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一定量的有害物質(zhì)4-甲基咪唑，GB 8817-2001《食品添加劑 焦糖色（亞硫酸銨法、氨法、普通法）》中規(guī)定，4-甲基咪唑在焦糖色中含量小于0.02%，然而啤酒并無(wú)相關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。

研究表明，4-甲基咪唑能導(dǎo)致動(dòng)物長(zhǎng)腫瘤，有可能給人體帶來(lái)致癌風(fēng)險(xiǎn)，目前，4-甲基咪唑檢測(cè)方法主要有分光光度法、色譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。

國(guó)內(nèi)對(duì)4-甲基咪唑的檢測(cè)主要集中于焦糖色原料，其次是對(duì)其相關(guān)食品醬油和可樂(lè)，對(duì)啤酒中4-甲基咪唑含量測(cè)定鮮見(jiàn)報(bào)道。

本研究建立固相萃取-超液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定啤酒中4-甲基咪唑含量，旨在為啤酒的安全性評(píng)價(jià)以及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供。

一、實(shí)驗(yàn)儀器

 氮吹儀  液質(zhì)聯(lián)用儀，高速離心機(jī)、電子天平、漩渦振蕩器、超聲波清洗器  

二、實(shí)驗(yàn)試劑 

4-甲基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品，4-MEI-D5（含量為98.7%），乙腈、甲醇、甲酸（純度≥98%）均為色譜純，氨水（分析純），鹽酸（優(yōu)級(jí)純），水為超純水。其他試劑均為分析純。

三、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

 4-甲基咪唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配置：稱取4-MEI 6.29mg（至0.0001g），用水溶解后轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，加水定容配置成質(zhì)量濃度為250μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃條件下保存。精密量取上述儲(chǔ)備液適量，加水制成每1ml含1.0μg的標(biāo)準(zhǔn)使用液，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的配置。

4-MEI-D5標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配置：稱取4-MEI-D5 9.38mg（至0.0001g）用水溶解后轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，加水定容，配置成質(zhì)量濃度為370μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃條件下保存。精密量取上述儲(chǔ)備液適量，加水制成1ml含0.5μg的對(duì)照內(nèi)標(biāo)使用液。

四、樣品處理

1提取：將啤酒倒入燒杯中超聲10min除盡熱氧化碳，取約5.0g（至0.01g）于100ml容量瓶中，加入水至刻度，混勻。10000rpm離心5 min，取上清液備用。

2凈化：移取約1.00ml提取液加入1.8ml水，加入100μl 0.02mol/L鹽酸溶液，加入100μl內(nèi)標(biāo)使用液，混勻后傾入已活化的固相萃取小柱中，待液體全部流出后，用3ml水、3ml甲醇淋洗小柱，用3ml含5%氨水的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液。

四、濃縮

收集洗脫液置于45℃水浴氮吹濃縮至干，殘?jiān)?.00ml水溶解，過(guò)0.22μm濾膜后，待測(cè)。

五、檢測(cè)

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