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蛋白質(zhì)的NR/R雙向?qū)€電泳

閱讀:873      發(fā)布時(shí)間:2018-10-17
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一、實(shí)驗(yàn)原理

NR/R雙向電泳的基本原理是根據(jù)LaemmLi的SDS電泳原理設(shè)計(jì)的,NR指的是非還原相,R指的是還原相。

 

SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳可將不同相對(duì)分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)按相對(duì)分子質(zhì)量大小分離開(kāi)來(lái)。NR/R雙向?qū)蔷€電泳的向是在非還原條件下的SDS電泳,電泳結(jié)束后將膠條切下,置于含 2-硫基乙醇的樣品處理液中處理,使其-S-S-鍵被還原斷裂,將處理后的膠條置于第二向SDS電泳槽的夾層中凝膠上方,然后進(jìn)行第二向電泳。

 

電泳結(jié)果中凡是即無(wú)鏈內(nèi)二硫鍵又無(wú)鏈間二硫鍵的蛋白質(zhì)均處于對(duì)角線上,凡含有鏈間二硫鍵的蛋白質(zhì),因二硫鍵斷裂,使兩條或兩條以上的肽鏈分開(kāi),相對(duì)分子質(zhì)量變小,遷移率加大,而出現(xiàn)在對(duì)角線的下方,凡含有鏈內(nèi)二硫鍵的蛋白質(zhì),因二硫鍵斷裂,而使肽鏈松散,遷移率降低,而出現(xiàn)在對(duì)角線的上方。

 

二、實(shí)驗(yàn)用品

  (一)器材

(1)垂直板型電泳裝置。

(2) 1ml 和100µL微量進(jìn)樣器,10µL微量進(jìn)樣器。

 

(二)試劑  

(1)向樣品處理用緩沖液:62.5mmol/L Tris.Hcl,2% SDS,10%甘氨酸,PH6.8。

(2)第二向樣品處理用緩沖液:62.5mmol/L Tris.Hcl,2% SDS,5%巰基乙醇,10%甘氨酸,PH6.8。     

(3)電泳緩沖液:同常規(guī)的SDS電泳,二向均相同。

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