一、實(shí)驗(yàn)原理

毛細(xì)管電泳是離子或荷電離子以電場為驅(qū)動(dòng)力，在毛細(xì)管中根據(jù)淌度或/和分配系數(shù)的差異進(jìn)行快速分離的一種電泳技術(shù)。毛細(xì)管電泳和傳統(tǒng)電泳的根本區(qū)別在于前者設(shè)法使電泳過程在散熱效率*的毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行，從而可以引入高的電場強(qiáng)度，*分離質(zhì)量。

電泳時(shí)，毛細(xì)管內(nèi)部首先充滿分離緩沖溶液，樣品從毛細(xì)管的一端導(dǎo)入，當(dāng)毛細(xì)管兩端加上一定的電壓后，荷電溶質(zhì)便朝與其極性相反的電極方向移動(dòng)，由于樣品各組分間淌度不同，引起遷移速度的差異，因而經(jīng)過一定時(shí)間后，各組分按其淌度大小順序，依次到達(dá)檢測器被檢出，得到按時(shí)間分布的電泳圖譜。

本實(shí)驗(yàn)系采用無膠篩分原理分離SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，并用于蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量測定，電泳分離SDS-蛋白質(zhì)及測定相對分子質(zhì)量的原理。無膠篩分是在常規(guī)CGE技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，后者與傳統(tǒng)的平板凝膠電泳分離的原理無異，都是根據(jù)分子的大小分離。我們知道，凝膠篩分介質(zhì)是指以化學(xué)交聯(lián)方式形成的膠狀多孔物質(zhì)，一旦成型，即很難改變，如聚丙烯酰胺。所謂無膠篩分介質(zhì)是由纏繞的聚合物以物理方式組成的分離介質(zhì) ，如線形聚丙烯酰胺、纖維素衍生物等，在溶液中形成一定大小的動(dòng)態(tài)孔徑，在CGE中，凝膠毛細(xì)管柱制備困難，壽命短，進(jìn)樣易堵塞等缺點(diǎn)，在CE的應(yīng)用受到很大限制。而采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度的交聯(lián)聚合物，可克服上述缺點(diǎn)，其物理參數(shù)可通過線性聚合物的種類、濃度等予以調(diào)節(jié)，而且每次分離后毛細(xì)管中的篩分緩沖液都要重新更換，因此，重現(xiàn)性很高。

目前，無膠篩分技術(shù)已廣泛用于分離寡核甘酸、核酸片段、PCR產(chǎn)物，DNA測序以及分離SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，后者已成為鑒定蛋白質(zhì)純度和測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的一個(gè)重要手段。

二、實(shí)驗(yàn)用品

（一）器材

（1）毛細(xì)管電泳儀。

（2）微型離心機(jī)。

（3）恒溫水浴鍋

（二）試劑  

（1）CE-SDS蛋白樣品緩沖液。

（2）0.1mol/L NaOH。   

（3）0.1mol/L HCL。

（4）CE-SDS蛋白電泳緩沖液。

（5）CE-SDS內(nèi)標(biāo)（1mg/mL苯甲酸）。

（6）CE-SDS蛋白標(biāo)準(zhǔn)：包括8種蛋白（20mg/mL）。

（三）材料

電泳純的牛血清白蛋白、卵蛋白溶菌酶和細(xì)胞色素C。

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