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技術文章

如何通過BLS電融合儀以及配件聚集創(chuàng)建胚胎

點擊次數(shù):1096 發(fā)布時間:2008-1-17

如何通過BLS電融合儀以及配件聚集創(chuàng)建胚胎

注射器內吸入培養(yǎng)基,在35mm組織培養(yǎng)板上微滴(大致直徑3mm)點樣成若干行(列)。向培養(yǎng)板內小心注入石蠟油使其覆蓋整板,注意不要使石蠟油直接傾倒在微滴上。石蠟油很容易越過這些微滴。石蠟油的量要能*覆蓋這些微滴。
使用配件按照說明操作,制作凹陷。
37度, 5% CO2條件下孵育培養(yǎng)板幾個小時,目的是讓培養(yǎng)基在液滴內達到平衡。這一步可以在形成凹陷的步驟之前進行。
                
實驗前準備好待聚集的細胞、組織或胚胎,不要將它們長時間暴露在室溫下或脫離zui適培養(yǎng)條件時間過長。通過在組織培養(yǎng)板蓋上加入幾滴M2培養(yǎng)基和Tyrode’s 酸溶液來去除卵透明帶。將組織培養(yǎng)板的培養(yǎng)區(qū)域表面如此處理后,胚胎將本能的黏附在表面——因此我們需要使用蓋。確認所有培養(yǎng)基溶液和酸液都接近室溫。將胚胎放置在一滴M2培養(yǎng)基上。取盡可能少的內含10-20個胚胎的培養(yǎng)基,并移到一滴酸液上。重復這個步驟并將胚胎移到新的一滴酸液上。讓胚胎在吸頭內保持上下移動,觀察卵透明帶是如何溶解的。迅速將胚胎移入M2培養(yǎng)基。用幾滴培養(yǎng)基溶液洗滌并移入剛才制成的凹陷中。
 
 
胚胎培養(yǎng)條件是聚集產(chǎn)量的一個重要因素,因為胚胎要培養(yǎng)過夜,如果是四倍體胚胎在移入母體前需要培養(yǎng)48小時。在培養(yǎng)的每個細節(jié)都必須小心操作控制。這包括溫度、大氣、培養(yǎng)基、室溫操作時間以及礦物油質量。

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