細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)

乾思 生物編輯整理： 教 師：XXX 實(shí)驗(yàn)類型：基礎(chǔ) 學(xué)　　時(shí)：8 （參考） 內(nèi)　　容： 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1.以檢測(cè)IL－2為例，使學(xué)生掌握一定的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。 2.使學(xué)生掌握一定的細(xì)胞因子檢測(cè)的一些主要方法。 3.掌握免疫細(xì)胞分離的主要技術(shù)和方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理： 檢測(cè)細(xì)胞因子對(duì)于闡明機(jī)體免疫應(yīng)答機(jī)制及相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律和臨床治療都有重要意義。細(xì)胞因子的檢測(cè)主要分為免疫學(xué)、生物學(xué)和分子生物學(xué)三種檢測(cè)方法。 生物學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞因子活性，其原理時(shí)根據(jù)細(xì)胞因子對(duì)特定的依賴性細(xì)胞株（即靶細(xì)胞）的促增值作用，以增值細(xì)胞中的DNA合成或者酶活性作為指標(biāo)，間接推算出細(xì)胞因子的生物學(xué)活性。 三、試劑與器材： 10％FCS－RPMI－1640培養(yǎng)液，刀豆蛋白A（ConA），3H－TdR，C57BL小鼠，IL－2標(biāo)準(zhǔn)品，PHA。 離心機(jī)、超凈臺(tái)、分光光度儀、細(xì)胞培養(yǎng)板等。 四、操作方法： 1.人外周血T細(xì)胞PBMC分離 2.PHA刺激產(chǎn)生IL－2 3.離心去沉淀回收上清 4.IL－2活性測(cè)定 5.CTLL－2細(xì)胞株培養(yǎng) 6.MTT摻入 7.測(cè)OD值570nm 8.結(jié)果分析 五、關(guān)鍵步驟與注意事項(xiàng)： 1.CTLL－2細(xì)胞存活率應(yīng)大于95％。 2.因標(biāo)本中含IL－4等，可影響TL－2的測(cè)定，采用抗IL－4 mAb吸附劑出去IL－4。 3.整個(gè)操作過(guò)程中應(yīng)該注意無(wú)菌操作。 4.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)要做復(fù)孔并設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照。 六、思考題： 1.誘導(dǎo)產(chǎn)生IL－2時(shí)需要注意哪些方面？ 2.IL－4會(huì)對(duì)IL－2的測(cè)定產(chǎn)生影響，應(yīng)如何消除？ 3.PHA誘導(dǎo)產(chǎn)生IL－2的機(jī)理是什么？

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