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中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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用于檢測(cè)抗體的ELISA

時(shí)間：2011/10/13閱讀：841
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乾思 生物編輯整理：
間接ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒） 本法主要用于檢測(cè)抗體。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）為例，間接ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）的操作程序如下。
　?。?） 材料
　?、?包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液；
　?、?DVH包被抗原、酶標(biāo)抗抗體、陰性及陽(yáng)性DVH參考血清；待檢鴨血清；
　?、?ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）檢測(cè)儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。
　　（2） 方法步驟
　?、?加抗原包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干
　　② 加待檢血清 → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干
　?、?加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干
　?、?加底物液 → 37℃ 30分鐘，加終止液
　?、?用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒）檢測(cè)儀測(cè)定OD值，并計(jì)算出P/N比值。
　　（3） 結(jié)果判定已知陽(yáng)性血清與已知陰性血清的比值（P/N）≥2.1，而且已知陽(yáng)性血清的OD值≥0.4；在上述條件成立的情況下，如果待檢血清與已知陰性血清的比值（P/N）≥2.1，而且待檢血清的OD值≥0.4，則判為陽(yáng)性，否則判為陰性。

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