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實時PCR實驗

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時間：2022-12-22 20:20:46瀏覽次數(shù)：1289次

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    實時PCR實驗（real-time PCR），屬于定量PCR（Q-PCR）的一種，以一定時間內(nèi)DNA的增幅量為基礎(chǔ)進(jìn)行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相對定量。可檢測mRNA，microRNA，lncRNA和DNA水平的基因拷貝數(shù)變化。

    實時PCR實驗具體方法

    1.SYBRGreen法：

    在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。

    SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖

    PCR產(chǎn)物熔解曲線圖（單一峰圖表明PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的單一性）

    2.TaqMan探針法：

    探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

    二、服務(wù)流程

    1、引物設(shè)計與合成
    2、DNA/RNA抽提
    3、反轉(zhuǎn)錄（針對RNA）
    4、上機(jī)定量分析
    三、客戶提供
    1、全血、組織或細(xì)胞。
    2、引物，或由豐核提供。
    3、基因信息：目的基因名稱、物種和序列（或GenBank Accession Number）。
    四、交付內(nèi)容
    實驗報告：詳細(xì)操作步驟
    原始數(shù)據(jù)：溶解曲線圖，擴(kuò)增曲線圖，ct值

    實時PCR實驗服務(wù)列表

    項目

    備注

    周期

    引物設(shè)計與合成

     

    3個工作日

    提取

    RNA提取、miRNA提取、DNA提取

    2個工作日

    反轉(zhuǎn)錄

     

    2個工作日

    qPCR反應(yīng)

    SYBR Green方法，相對定量

    2個工作日

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