上海原代細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn) 返回列表頁

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密,不利于各個細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，即使采用
1mm3的組織塊,也只有少量處于周邊的細(xì)胞可能生存和生長，若需獲取大量細(xì)胞,必須將現(xiàn)有的組織塊
充分散開，使細(xì)胞解離出來，常采用的方法如下:

一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘,
若懸液量大，可適當(dāng)延長離心時間,但速度不能太高,延時也不能太長，以避免擠壓或機(jī)械損傷細(xì)胞，離
心沉淀用無鈣、鎂PBS洗兩次,用培養(yǎng)基洗一次后, 調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后再分瓶培養(yǎng),若選用懸液中某些
細(xì)胞，常采用離心后的細(xì)胞分層液，因?yàn)?，?jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層,
這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。
(一)機(jī)械分散法
所取材料若纖維成分很少，如腦組織，部分胚胎組織可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散組織細(xì)胞或?qū)⒁殉浞旨羲榉稚⒌慕M織放在注射器內(nèi)(用九號針)，使細(xì)胞通過針頭壓出,或在不銹鋼紗網(wǎng)內(nèi)用鈍物壓擠(常用注射器鈍端)使細(xì)胞從網(wǎng)孔中壓擠出。此法分離細(xì)胞雖然簡便、快速,但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差。此法僅適用于處理纖維成分少的軟組織。
(二)消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的
橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松,由塊狀變成絮狀，此時再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。