病理TUNEL 返回列表頁

細胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測，這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細胞凋亡的原理。

Tunel染色

（1） 脫蠟：65℃、30min；二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ；

（2）水化：將脫蠟后的切片經(jīng)100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、雙蒸水各3min ；

（3）消化：將玻片浸入胰蛋白酶內(nèi)消化40分鐘，PBS洗3min×3次。

（4）制備TUNEL反應(yīng)混合液。

（5）加50μl TUNEL反應(yīng)混合液于標本上，加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應(yīng)37℃反應(yīng)1h；PBS洗3min×3次。

（6）加50ul POD于標本上，加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應(yīng)37℃×30min，PBS洗3min×3次。

（7）DAB染色3-10min，自來水沖洗，蘇木素復染， 1%鹽酸酒精分化，顯微鏡下觀察，控制染色程度。

（8）脫水：75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精，逐級脫水、各3min.

（9）透明：二甲苯透明3min×2次。

（10）中性樹膠封片。

注：

以上是石蠟包埋樣本的處理方式