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多囊卵巢模型構(gòu)建方法

多囊卵巢綜合征（PCOS）是一種復(fù)雜的內(nèi)分泌疾病，影響女性的生殖健康和代謝。為了研究PCOS的發(fā)病機(jī)制和潛在治療方法，科學(xué)家們開發(fā)了多種動物模型。

以下是大鼠多囊卵巢模型構(gòu)建的常用方法：

  1.藥物誘導(dǎo)法：使用外源性雄激素，如脫氫表雄酮（DHEA）或liusuanpulagaotongna，通過皮下注射的方式給予動物。例如，可以從21日齡開始，每天注射一定          劑量的liusuanpulagaotongna，連續(xù)注射20天，以建立PCOS模型。

  1.遺傳修飾法：利用基因工程技術(shù)創(chuàng)建攜帶PCOS相關(guān)基因突變的動物模型。

  1.飲食誘導(dǎo)法：通過高脂飲食或高糖高脂飲食誘導(dǎo)動物模型，模擬PCOS患者的代謝異常。有時，藥物誘導(dǎo)和飲食誘導(dǎo)會結(jié)合使用，以增強模型的PCOS特征。

例： 21日齡未成年雌性SD大鼠，注射用liusuanpulagaotongna，注射用水，血清睪酮（T）、雌二醇（E?）、huangtitong（P）、催乳素（PRL）檢測試劑盒。

模型鼠于21日齡斷乳，喂以顆粒飼料，自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)2天。第23 日開始每日皮下注射liusuanpulagaotongna9mg/100g(相當(dāng)于DHEA6mg/100g)+0.4ml注射用水，連續(xù)20天，以建立PCOS大鼠模型。大鼠于注藥后21日晨用6%shuihelvquan麻醉，摘取雙側(cè)卵巢，在解剖顯微鏡下去除卵巢表面脂肪組織，稱重，分別用4%多聚甲醛固定作光鏡HE 染色及2.5%戊二醛固定作透視電鏡檢查。于注藥后21日晨取大鼠下腔靜脈血，3000r/min，離心3分鐘，收集血清，-20℃保存。采用化學(xué)免疫發(fā)光法檢測血清中T、E?、P、PRL含量。

【模型特點】

1.卵巢體積偏大，表面蒼白，可見較多囊性擴(kuò)張的卵泡，重量明顯高于正常卵巢。

2.光鏡HE 染色觀察，卵巢切面沿包膜下見較多大小基本一致的囊性擴(kuò)張的卵泡，卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞或放射冠消失，顆粒細(xì)胞排列松散，顆粒細(xì)胞層變薄至2~3層甚至消失，卵泡膜細(xì)胞增生，較少有黃體形成。

3.透視電鏡觀察，卵巢顆粒細(xì)胞層數(shù)減少，細(xì)胞器數(shù)量及細(xì)胞內(nèi)脂滴減少，顆粒細(xì)胞形態(tài)變形，呈梭形變，細(xì)胞核核形不整，核內(nèi)染色質(zhì)濃集。細(xì)胞間纖維增生，線粒體腫脹，線粒體嵴斷裂甚至消失。卵泡膜細(xì)胞層數(shù)增多，細(xì)胞內(nèi)可見到脂滴。

4.血清T濃度非常顯著性增高，血清E?濃度顯著性增高。

參考：

[1]廖寶瑩等, 多囊卵巢綜合征的嚙齒類動物模型. 中華生殖與避孕雜志, 2021. 41(10): 第8頁.

[2]彭洋洋, 張怡與謝青貞, 脫氫表雄酮聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)建立小鼠多囊卵巢綜合征模型的研究. 生殖醫(yī)學(xué)雜志, 2021. 30(12): 第1627-1633頁.