CRISPR/Cas12b系統(tǒng)實(shí)驗(yàn) 返回列表頁(yè)

一、分子機(jī)制與結(jié)構(gòu)特性

（一）系統(tǒng)定義與分類

CRISPR/Cas12b（原稱 C2c1）屬于 Class 2 Type V-B 型 CRISPR 系統(tǒng)，是繼 Cas9 和 Cas12a 后的重要基因編輯工具。其核心特征包括：

1. 雙 RNA 引導(dǎo)機(jī)制：

• 需 crRNA 與 tracrRNA（可融合為 sgRNA）共同引導(dǎo)靶向切割，兼具 Cas9 與 Cas12a 的部分特性 。

2. 切割模式：

• 單一 RuvC 結(jié)構(gòu)域 切割雙鏈 DNA，形成 5-6 nt 的黏性末端（5' 突出），利于同源重組修復(fù)（HDR）。

3. PAM 識(shí)別：

• 依賴 T-rich PAM 序列（如 5'-TTN-3'），擴(kuò)展了 AT 富集基因組的編輯能力 。

（二）結(jié)構(gòu)優(yōu)勢(shì)

二、技術(shù)優(yōu)勢(shì)與性能

（一）核心優(yōu)勢(shì)

1. 低脫靶率：

• GUIDE-seq 檢測(cè)顯示脫靶率 顯著低于 Cas9（錯(cuò)誤插入/缺失減少 >50%）。

2. 高特異性：

• crRNA 引導(dǎo)序列更長(zhǎng)（>42 nt），靶向精度更高 。

3. 編輯模式：

• 誘導(dǎo) 純插入突變率低，更傾向于產(chǎn)生小片段缺失，減少功能不可預(yù)測(cè)性 。

4. 病毒載體適配性：

• 小分子量更易包裝進(jìn) AAV 或慢病毒載體，提升體內(nèi)遞送效率 。

（二）與同類系統(tǒng)對(duì)比

注：Cas12b 切割模式使其在 基因治療 中避免產(chǎn)生新表位，降低免疫風(fēng)險(xiǎn) 。

三、應(yīng)用場(chǎng)景與前沿案例

（一）生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用

1. 抗病毒治療：

• HIV ：在 T 細(xì)胞中單次編輯即可清除全部傳染性 HIV，效率優(yōu)于 Cas9 。

2. 遺傳病修復(fù)：

• 聯(lián)合 HDR 通路實(shí)現(xiàn) β-地中海貧血基因精準(zhǔn)修復(fù)，血紅蛋白恢復(fù)至正常水平 。

3. 腫瘤免疫：

• 編輯 PD-1/CTLA-4 雙靶點(diǎn)，降低 CAR-T 細(xì)胞耗竭 。