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取材固定:離體的組織不及時固定,組織就會自溶,抗原就會擴散。固定就是加入一些可以讓蛋白質(zhì)變性的物質(zhì)(比如說甲醛),使得蛋白質(zhì)的結構被固定住,不再發(fā)生變化,同時也不會再發(fā)生-一些活性反應,這樣才好做后續(xù)的染色步驟。常見固定液是4%的多聚甲醛。根據(jù)不同目的、組織特征代表性取材。取的材料應該小而薄。便于固定劑迅速滲入內(nèi)部,一般厚度不超過2mm,大小不超過5X5mm。每個組織多切幾塊。新鮮組織固定(組織塊不宜太大太厚,這樣固定液很難進入里面,可能會導致在較短的時間內(nèi)脫水不*,引起一系列的問題,比如浸蠟不*,切片不好完成,切不完整。導致后來切片染色的脫落,造成染色的失敗。組織塊也不能太小,否則不能保證切片數(shù)量,且透明時間和浸蠟時間不能很好的把握。)固定時間因固定劑種類而異,大多6-12小時,一般不超過12 小時。視組織固定的難易程度而定。后續(xù)如果做免疫組化,不應超過12 小時;后續(xù)如果做HE染色,不
應超過24小時。固定完之后用水洗(目的:洗去滲入組織的固定液,終止固定以免影響對組織的內(nèi)結構的觀察,分析。換液兩次,一次半小時。)之后可直接脫水包埋或放入75%的乙醇4度可長期保存。
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