2D-DIGE實(shí)驗(yàn)

DIGE：雙向熒光差異凝膠電泳，是在傳統(tǒng)雙向電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的新型蛋白質(zhì)組學(xué)定量技術(shù)，其分離蛋白質(zhì)混合的原理與雙向電泳是一致的，主要利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量的差異來(lái)分離蛋白質(zhì)混合物，同時(shí)應(yīng)用熒光染料的靈敏度及內(nèi)標(biāo)的使用等技術(shù)，使其在定量蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)雙向電泳。
 DIGE使用的熒光染料有Cy2, Cy3和Cy5，它們能與蛋白質(zhì)的賴氨酸側(cè)鏈氨基反應(yīng)而使蛋白質(zhì)被標(biāo)記，被標(biāo)記蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量不受影響，等量混合標(biāo)記好的蛋白質(zhì)后進(jìn)行雙向電泳，不同凝膠之間可以通過(guò)cy2內(nèi)標(biāo)匹配，消除凝膠之間的差異，蛋白質(zhì)表達(dá)量的變化則通過(guò)cy3和cy5不同熒光的強(qiáng)度來(lái)體現(xiàn)。

2D-DIGE實(shí)驗(yàn)與常規(guī)雙向電泳后，銀染或考染膠相比，DIGE具有以下優(yōu)勢(shì)：
 1、靈敏度高，低可檢測(cè)到125pg的蛋白質(zhì)；
 2、高效性，同一塊凝膠上可以電泳兩個(gè)樣品，減輕了工作量；
 3、線性范圍更廣,動(dòng)態(tài)范圍高達(dá)10-5；
 4、定量, 采用內(nèi)標(biāo)消除了凝膠與凝膠之間的實(shí)驗(yàn)誤差，顯著提高了實(shí)驗(yàn)的度和可重復(fù)性；
 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，ImageMaster7.0（DIGE）軟件可以得到統(tǒng)計(jì)學(xué)可信的結(jié)果，降低了操作者之間的偏差。