SILAC實(shí)驗(yàn)

背景簡介：SILAC( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技術(shù)是依據(jù)細(xì)胞生長對必需氨基酸的依賴原理，利用穩(wěn)定同位素標(biāo)記( 13C，15N，2H)的必需氨基酸對細(xì)胞蛋白質(zhì)組進(jìn)行代謝標(biāo)記的方法；13C,15N,2H是穩(wěn)定同位素，沒有放射性，因此可以在常規(guī)條件下進(jìn)行試驗(yàn)。

Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。將(13C，15N，2H)等穩(wěn)定同位素標(biāo)記的R、K、L加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，在細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)合成時，這些穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸自然被“摻入”到蛋白質(zhì)中。通過>6代的細(xì)胞增殖，整個細(xì)胞的蛋白質(zhì)組會被穩(wěn)定同位素氨基酸”標(biāo)記

SILAC“標(biāo)記”了蛋白質(zhì)與“未標(biāo)記”的蛋白質(zhì)（普通培養(yǎng)基培養(yǎng)）存在數(shù)目的質(zhì)量差異，該質(zhì)量差異在后續(xù)LC-MS的質(zhì)譜( MSl)中呈現(xiàn)一對同位素質(zhì)譜峰，通過質(zhì)譜峰的信號強(qiáng)度能實(shí)現(xiàn)對2組樣品中每一個蛋白質(zhì)表達(dá)水平的相對定量，終能確定蛋白質(zhì)表達(dá)水平差異（差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析）和區(qū)分特異性和非特異性相互作用（蛋白質(zhì)相互作用分析）；同時通過二級質(zhì)譜( MS/MS，MS2)實(shí)現(xiàn)對樣品中蛋白質(zhì)的鑒定。

SILAC實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)合LC-MS能同時實(shí)現(xiàn)對2組樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。實(shí)驗(yàn)技術(shù)“高、大、上”，定量，通過定墨信息能直接反映出樣品之間的蛋白質(zhì)表達(dá)水平差異，便于快速找到感興趣的目標(biāo)分子。同時，利用SILAC技術(shù)，能明顯提高文章的檔次。