大鼠平滑肌細胞的另一種培養(yǎng)方法

器械
顯微器械：眼科剪一把，直彎眼科鑷各一把，細結鑷一把，手術刀一把，針頭諾干
殺老鼠器械：手術剪一把，大鑷子一把，彎眼科鑷一把，組織鉗一把，50ml燒杯一個（錫紙包好）
另外：10ml離心管兩個，培養(yǎng)皿兩個，10ml的瓶子三個，小濾器兩個，硅膠板一塊，培養(yǎng)瓶蓋子諾干
貳。試劑
D-HANKS液250ml，雙抗2ml（青霉素16萬U/ml鏈霉素15萬U/ml）。FBS和含20％FBS的DMEM
叁。步驟
1． 取大鼠，稱重，水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉
2． 綁好大鼠，先剪開腹腔，剪斷腹部大動脈放血，后剪開胸腔，取肺
3． 放入燒杯，后移入超凈臺，置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作
4． 倒入已加雙抗的D-HANKS，清洗肺部，扯掉食管，剪掉心臟
5． 用針頭將肺固定在硅膠板上，硅膠板置于培養(yǎng)皿里
6． 用鑷子將肺的內(nèi)外膜除去，只剩下平滑肌
7． 用眼科剪將肺部剪成1－2mm的小碎塊
8。在培養(yǎng)瓶中加入一到兩滴的FBS，輕搖培養(yǎng)瓶，使血清鋪滿瓶底。
9。用眼科剪將碎塊放進瓶中，后用滴管將碎塊在瓶里鋪均勻。
10。將瓶底朝上，放入培養(yǎng)箱中
11。四個小時后，將瓶子翻回
這樣處理后，一般五天內(nèi)不用看它，第六天開始，可以加入含20％FBS的DMEM
兩種方法比較，貼壁法的優(yōu)點在于時間較少，所用試劑少，不用出去離心，較少污染機會。
但據(jù)我們實驗室的經(jīng)驗，貼壁法較消化法爬出細胞的時間較長，且細胞不大純，活性較差。戰(zhàn)友們可以根據(jù)自己的需要選折