薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑,帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上,涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi),浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時,將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。
薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;另一方面若在制作薄層板時,把吸附層加厚,將樣品點成一條線,則可分離多達500mg的樣品。因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外,在進行化學(xué)反應(yīng)時,常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。
薄層色譜儀的主要特點
1.掃描速度快并且分辨率高:20mm/s,分辨率50μm ;(掃一塊200X 100 mm 的點有20個點的薄層板,約需時3 分鐘 , 掃描完畢立刻得到計算結(jié)果。)可以檢測厚達4mm 的薄層板。
2.掃描方式全:線性掃描, 線性—飛點掃描,雀斑軌跡優(yōu)化。
3.多用性:可廣泛用于凝膠電泳和等電聚焦等蛋白質(zhì)、核酸研究等生化分析。
4.薄層色譜儀操縱簡便,結(jié)果重現(xiàn)性好。
5.軟件全自動控制和數(shù)據(jù)處理。
6.薄層色譜儀掃描速度快。
7.檢測光譜范圍寬。
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