高效液相色譜(HPLC)是實(shí)驗(yàn)室中一種重要的分離方法,色譜柱更是被稱為分離的心臟。高效液相色譜在日常使用中不可避免地會(huì)遇到色譜柱的各種故障,因此,做好色譜柱的提前維護(hù)是非常重要的。
一、試驗(yàn)樣品需過(guò)濾
試驗(yàn)樣品中的不溶性物質(zhì)進(jìn)入色譜柱后,會(huì)使進(jìn)樣過(guò)濾器和填料堵塞,柱壓升高,從而破壞分離,因此樣品應(yīng)盡可能干凈地注入。在任何情況下,建議使用約0.5μM左右的過(guò)濾器過(guò)濾樣品。
二、謹(jǐn)防色譜柱污染
有時(shí),在過(guò)濾后,仍然發(fā)生色譜柱堵塞和污染等情況,這可能是由于樣品中存在夾雜物導(dǎo)致溶解性差的成分向流動(dòng)相析離、被填料牢固地保持的夾雜成分的吸附、以及微注射器污染等原因?qū)е碌摹R虼?,?yīng)該在分析前使用過(guò)濾器和保護(hù)柱,以盡可能地去除這些污染物。過(guò)濾器通常配有孔徑約為1μm的過(guò)濾器,能有效去除堵塞物;防護(hù)柱是安裝在分析柱前的短柱,起到捕捉吸附在填料上的包裹體的作用。
三、保證色譜柱潔凈
上述保護(hù)柱的去污效果有限,因此在每次分析樣品后,要根據(jù)樣品的不同,在每數(shù)次分析樣品之后進(jìn)行一次清潔。
四、色譜柱輕拿輕放
色譜柱內(nèi)充滿數(shù)微米的細(xì)小顆粒,應(yīng)避免沖擊和外壓的劇烈變化,以免損壞色譜柱。
五、確認(rèn)流動(dòng)相的制約
有時(shí)色譜柱會(huì)受pH值、有機(jī)溶劑劑量的限制,因此需要在使用前充分確認(rèn)。
六、按需要使用不同的色譜柱
如果一個(gè)色譜柱用于各種分析,那么以前的測(cè)試數(shù)據(jù)有時(shí)不會(huì)出現(xiàn)。此外,如果重復(fù)做流動(dòng)相條件差別大的分析的話,色譜柱的劣化也將加塊。因此,有必要對(duì)各色譜柱的使用情況進(jìn)行記錄。
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