液相色譜柱流動相的配制和流速的選擇

來源：廣州太瑋生物科技有限公司 2021年07月05日 15:02

液相色譜柱流動相的配制和流速的選擇

1、流動相的配制

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

(1) 流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

(2) 流動相與樣品不產(chǎn)生化學反應

(3) 流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

(4) 流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

(5) 流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行。

(6) 在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

2、流動相流速的選擇

因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

當選用最佳流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。

注意：

(1) 含水流動相最好在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最好加入*，防止細菌生長。

(2) 流動相要求使用0.45 μm或0.22μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。

(3) 使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

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