各種動(dòng)物外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒說明書

各種動(dòng)物外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒

規(guī)格：200 mL/kit

保存：本產(chǎn)品對(duì)光敏感，應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存，保質(zhì)期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。

試劑盒組成： 

試劑A 200mL

試劑C 100mL

細(xì)胞洗滌液 200mL

紅細(xì)胞裂解液 100mL

操作步驟： 

1. 取新鮮抗凝全血，血液體積小于5mL時(shí)，在離心管中先加入4mL試劑A，后將2mL試劑C小心疊

加于試劑A之上，形成梯度界面（血液體積大于等于5mL，試劑A與試劑C比例2：1，試劑總量與稀

釋后的樣本量相等。但二者的總體積不能超過離心管的三分之

二，否則會(huì)影響分離效果），將血液平鋪到分離液液面上方，

注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，

然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町悾瑢?/p>

形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時(shí)間較長，在離

心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象。）

2. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積

越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長，最佳的分離條件需摸

索，離心轉(zhuǎn)速最大不超過1200g）。

3. 離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層，上層細(xì)

胞為單個(gè)核細(xì)胞層，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層，如圖所示（個(gè)

體差異或者是分離條件不同，粒細(xì)胞層可分離不明顯）。

4. 用吸管小心吸取試劑C與試劑A之間以及試劑A中的中性

粒細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌

細(xì)胞。250g，離心10min（如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞

裂解液）。

5. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心

10min。

6. 重復(fù)步驟6

7. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。

注意事項(xiàng)： 

A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o菌條件下啟封，避免

微生物污染。。

B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是

分離示意圖

血漿層

單個(gè)核細(xì)胞層

試劑 C

試劑 A

紅細(xì)胞層

中性粒細(xì)胞層

溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。

C. 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），為保持淋巴細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。

D. 血液樣本不需稀釋，直接進(jìn)行分離即可。

E. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，

大大降低細(xì)胞得率及純度。

F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。

G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì)影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸

索最佳的分離條件。

H. 如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生

物污染。

I. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提

供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。