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紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光路系統(tǒng)由脈沖氙燈光源，凹面光柵單色器，反射鏡，狹縫等組成。脈沖氙燈具有瞬時(shí)發(fā)光強(qiáng)度大、光譜范圍廣、紫外光度強(qiáng)、無(wú)需預(yù)熱等特點(diǎn)，為后面的檢測(cè)快速提供可靠實(shí)用的光源信號(hào)。脈沖氙燈發(fā)出紫外光，經(jīng)由步進(jìn)電機(jī)帶動(dòng)的凹面光柵分光系統(tǒng)組成的單色器裝置。經(jīng)光柵色散分光后的光線，經(jīng)過(guò)半透半反鏡可以將光束一分為二，一束由出射狹縫射出，進(jìn)入樣品池，另一束作為參考光用于修正光源波動(dòng)，整個(gè)過(guò)程同步實(shí)現(xiàn)了分光、檢測(cè)和基線校正等功能。被吸收后的光信號(hào)經(jīng)光電二極管轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的電信號(hào)，經(jīng)過(guò)AD轉(zhuǎn)換后再通過(guò)無(wú)線數(shù)據(jù)傳輸傳送到上位機(jī)進(jìn)行實(shí)時(shí)顯示、紫外光度計(jì)軟件對(duì)其進(jìn)行存儲(chǔ)并處理。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)工作原理
分子的紫外可見(jiàn)吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后，發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比；如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對(duì)光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測(cè)定紫外可見(jiàn)吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)*一致。如果沒(méi)有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測(cè)定條件要相同。
實(shí)驗(yàn)證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同，這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑。
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