噬菌體肽庫篩選服務(wù)

1.多肽文庫篩選概念

多肽文庫是指大量特定長度且序列不同的小肽的集合,它包括了該長度短肽中各種(或絕大部分)氨基酸序列的排列組合。多肽文庫是一種強大的篩選工具。它用于從大批量多肽中篩選極少量具有關(guān)鍵生物活性的多肽。

2.多肽文庫類型

（1）重疊肽庫：單個肽可以分成幾個重疊的片段。由此產(chǎn)生的重疊肽庫隨后可用于包括連續(xù)和線性表位作圖在內(nèi)的過程。

（2）截斷肽庫：截斷肽庫可用于預(yù)測確定表位活性的最小長度氨基酸。

（3）丙氨酸肽掃描文庫：每個氨基酸殘基都被丙氨酸單獨和系統(tǒng)地取代。該庫可以快速確定每個氨基酸對肽功能的貢獻。

（4）隨機肽庫：隨機肽庫被設(shè)計為序列優(yōu)化的工具，選定的位置同時被所有20種天然氨基酸取代，可以增加肽活性。

（5）亂序肽庫：亂序庫在所有肽庫中具有較高的變異性。所得肽通常用作陰性對照，以表明特定序列對蛋白質(zhì)功能或活性至關(guān)重要。它也是一種用于尋找新線索的隨機篩選工具。

（6）位置肽庫：肽序列中選定的位點或區(qū)域被系統(tǒng)地替換為所有其他天然氨基酸。這允許識別增強肽活性的氨基酸。

3.多肽文庫篩選應(yīng)用

多肽文庫在蛋白質(zhì)組學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域應(yīng)用范圍非常廣泛，如藥物研發(fā)（科研級 Bevacizumab ( cat：YR1001 )）、蛋白-蛋白相互作用、抗原表位篩選、GPCR配體篩選、蛋白功能分析、酶底物或抑制劑篩選、信使分子研發(fā)及多肽/蛋白信號對答等。

4.多肽文庫篩選技術(shù)亮點

（1）可以高通量生產(chǎn)，篩選效率高

（2）可快速制備可溶抗原

（3）可以準確的定位抗原決定簇，廣泛用于藥物開發(fā)

5.卡梅德生物能夠為客戶提供高質(zhì)量的肽庫篩選服務(wù)

基于噬菌體平臺，卡梅德生物擁有多樣性文庫，如下圖2，可以為客戶構(gòu)建隨機7肽文庫，12肽文庫，15肽文庫等。卡梅德生物提供的T7噬菌體展示平臺是一種超高通量的配體篩選方式，通過該技術(shù)平臺可以構(gòu)建多達10¹³/ml個經(jīng)過噬菌體展示的多肽或抗體克隆，平均可以做到獨立克隆數(shù)為10⁹-10¹⁰/ml，經(jīng)過后續(xù)多輪淘篩可以提供多達10⁵有效多肽或抗體的序列。

6.卡梅德生物為客戶提供肽庫篩選服務(wù)的全流程介紹

肽庫篩選主要分為以下大致流程：目的蛋白質(zhì)量驗證，噬菌體滴度檢測，噬菌體擴大培養(yǎng)，噬菌體淘選，測序，流程圖如下：

6.1目的蛋白質(zhì)量驗證

目的蛋白進行SDS-PAGE電泳，要求蛋白純度>95%，才能進行下一步文庫篩選。

6.2噬菌體滴度檢測

TG1菌株接種到LB培養(yǎng)基進行活化培養(yǎng)，LB培養(yǎng)基添加瓊脂糖后，按照梯度稀釋法培養(yǎng)噬菌體，培養(yǎng)完成的噬菌體涂布至瓊脂平板，進行噬菌斑計數(shù)。

6.3噬菌體擴大培養(yǎng)

TG1菌株培養(yǎng)至OD600 0.4 ~0.6后，接種到經(jīng)過擴大培養(yǎng)的宿主菌種，震蕩離心，上清即為噬菌體培養(yǎng)物。

6.4噬菌體淘選

將純化的目的蛋白用96孔酶標板進行抗原包被過夜，脫脂內(nèi)粉進行封閉，加入擴大培養(yǎng)的噬菌體孵育，緩沖液多次洗脫，進行噬菌體滴度測定，濃縮純化后等待下一輪篩選。重復(fù)以上步驟2次，完成后兩輪篩選。

6.5測序

從第三輪篩選后的細菌平板上挑取48個單克隆，經(jīng)過擴增培養(yǎng)后提取質(zhì)粒進行測序。

7.多肽噬菌體展示文庫篩選實驗結(jié)果