DNA 恒溫快速擴(kuò)增試劑盒熒光型說明書

DNA 恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型）

產(chǎn)品參數(shù)：

原理概述：

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在常溫恒溫下，重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體 Rec/ssDNA，在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白 SSB 的幫助下，侵入雙鏈 DNA 模板；在侵入位點(diǎn)形成 D-loop區(qū)域，并開始對(duì) DNA 雙鏈進(jìn)行掃描；待找到與引物互補(bǔ)的目的區(qū)域后，復(fù)合體Rec/ssDNA 解體的同時(shí)，聚合酶也結(jié)合到引物的 3’末端，開始鏈的延伸。本試劑盒在39 oC 下，依賴核酸外切酶的作用，加入根據(jù)模板設(shè)計(jì)的特異的分子探針，使用熒光監(jiān)測(cè)設(shè)備能實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)片段擴(kuò)增過程的實(shí)時(shí)監(jiān)控。

引物設(shè)計(jì) ：

建議使用長(zhǎng)度在 30-35 bp 的引物，引物過短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度；引物設(shè)計(jì)避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增；擴(kuò)增子長(zhǎng)度建議在 150-300 bp，通常不超過 500 bp。

熒光探針設(shè)計(jì)：

探針序列不與特異性引物識(shí)別位點(diǎn)重疊，長(zhǎng)度為 46-52 nt，序列避免回文序列、內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基。探針共有四個(gè)修飾位點(diǎn)：距離 5’端的≥ 35 nt 的中部位置標(biāo)記一個(gè) dSpacer（四氫呋喃，THF），作為核酸外切酶的識(shí)別位點(diǎn)；THF 位點(diǎn)的上游標(biāo)記一個(gè)熒光基團(tuán)，下游標(biāo)記一個(gè)粹滅基團(tuán)，兩個(gè)基團(tuán)的間距為2-4 nt；THF 距離3’末端≥15 nt，并且 3’末端標(biāo)記一個(gè)修飾基團(tuán)，例如胺基、磷酸基團(tuán)或 C3-Spacer。

正對(duì)照熒光結(jié)果圖： P：正對(duì)照；N：陰性對(duì)照

產(chǎn)品特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)：

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短（僅需 20 min）等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡(jiǎn)便，易于保存。可適用于各種品牌的熒光定量 PCR 儀、恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增儀器等熒光檢測(cè)設(shè)備。

產(chǎn)品用途：

適用于實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的DNA擴(kuò)增以及其他檢測(cè)用途的DNA擴(kuò)增使用。

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