如何處理被細菌污染的細胞？

當發(fā)現(xiàn)細胞被細菌污染后，可以嘗試以下處理方法：

一、初步判斷細菌類型

1. 革蘭氏染色法

①　操作過程：首先，制作細胞涂片，自然干燥后，通過火焰固定。然后用結(jié)晶紫初染 1 - 2 分鐘，水洗后加碘液媒染 1 分鐘，再用 95% 乙醇脫色約 30 秒（具體時間可根據(jù)涂片的實際情況調(diào)整），最后用番紅復染 1 - 2 分鐘。水洗、干燥后在顯微鏡下觀察。

②　判斷依據(jù)：如果細菌被染成紫色，為革蘭氏陽性菌；如果被染成紅色，則為革蘭氏陰性菌。這一步很關(guān)鍵，因為不同類型的細菌對不同抗生素的敏感性不同，革蘭氏染色可以為后續(xù)選擇合適的抗生素提供參考。

二、抗生素處理（如果細胞非常珍貴，值得嘗試挽救）

1. 選擇抗生素

①　針對革蘭氏陽性菌：可以選擇青霉素、鏈霉素、紅霉素等。例如，青霉素能夠抑制細菌細胞壁的合成，對革蘭氏陽性菌有較好的抗菌效果。使用濃度一般為 10 - 100 U/mL（青霉素）、10 - 100μg/mL（鏈霉素）、0.3 - 3μg/mL（紅霉素），具體濃度可以根據(jù)抗生素的說明書和細胞對藥物的耐受性進行調(diào)整。

②　針對革蘭氏陰性菌：常用慶大霉素、卡那霉素、氯霉素等。慶大霉素能與細菌核糖體 30S 亞基結(jié)合，阻斷細菌蛋白質(zhì)合成，對革蘭氏陰性菌抗菌活性較強。使用濃度通常為 10 - 100μg/mL（慶大霉素）、10 - 100μg/mL（卡那霉素）、10 - 100μg/mL（氯霉素）。

2. 處理步驟

①　配制含抗生素的培養(yǎng)基：將選擇好的抗生素加入到新鮮的細胞培養(yǎng)基中，充分混勻。需要注意的是，抗生素的加入可能會對細胞本身產(chǎn)生一定的影響，所以要盡量選擇對細胞毒性較小的抗生素，并通過預實驗確定合適的濃度。

②　更換培養(yǎng)基并培養(yǎng)細胞：小心地棄去被污染的培養(yǎng)基，用 PBS 緩沖液輕輕洗滌細胞 1 - 2 次，以去除部分細菌和殘留的污染培養(yǎng)基。然后加入含抗生素的新鮮培養(yǎng)基，將細胞放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，要密切觀察細胞的狀態(tài)，如細胞的形態(tài)、生長速度等。

三、che底清除細菌的措施

1. 多次洗滌和換液

①　除了使用抗生素處理外，還可以通過多次用無菌的 PBS 緩沖液洗滌細胞來減少細菌數(shù)量。一般可以進行 3 - 5 次洗滌，每次洗滌后更換新的含抗生素培養(yǎng)基。這樣可以逐漸清除細菌及其代謝產(chǎn)物，減輕對細胞的不良影響。

2. 聯(lián)合使用抗生素和其他方法

①　例如，在使用抗生素的同時，可以適當降低培養(yǎng)溫度。因為有些細菌在較低溫度下生長速度會減慢，而細胞在一定程度上能夠耐受較低的溫度。如將培養(yǎng)溫度從 37℃降低到 30℃ - 32℃，持續(xù)一段時間，配合抗生素處理，可能會更有效地清除細菌。

四、細胞復蘇與重新培養(yǎng)（如果細胞被挽救成功）

1. 復蘇

①　當細胞在含抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，細菌污染得到控制，細胞狀態(tài)逐漸恢復正常。此時，可以將細胞消化下來，用正常的培養(yǎng)基（不含抗生素）進行稀釋，然后接種到新的培養(yǎng)瓶中。

2. 驗證無污染

①　在細胞復蘇并培養(yǎng)幾代后，要通過多種方法驗證細胞是否真正清除了細菌污染。可以再次進行顯微鏡觀察，確保沒有細菌存在；也可以使用一些快速檢測試劑盒進行檢測，如細菌培養(yǎng)檢測試劑盒，將細胞培養(yǎng)上清液接種到特定的細菌培養(yǎng)基中，觀察是否有細菌生長，以確認細胞已經(jīng)wan全恢復正常。

不過需要注意的是，細胞被細菌污染后，成功挽救的概率相對較低，為了確保實驗結(jié)果的準確性，一般建議如果細胞被細菌污染嚴重，最好重新獲取細胞進行培養(yǎng)。