伯樂(lè)電泳槽的使用方法

伯樂(lè)電泳槽的使用方法

伯樂(lè)電泳槽（如 1658001 和 1658003）是一種廣泛用于核酸（DNA、RNA）和蛋白質(zhì)分離的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。以下將詳細(xì)介紹伯樂(lè)電泳槽的使用方法，從設(shè)備準(zhǔn)備到實(shí)驗(yàn)完成的每個(gè)步驟都涵蓋其中，以幫助實(shí)驗(yàn)人員高效、安全地操作該設(shè)備。

一、設(shè)備準(zhǔn)備

1.1 檢查設(shè)備

• 確保電泳槽的所有組件（凝膠托架、電極組件、緩沖液槽等）完整無(wú)損。

• 檢查電極線連接無(wú)破損，確保實(shí)驗(yàn)安全。

• 確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境干燥，避免設(shè)備短路。

1.2 選擇緩沖液

根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)選擇適合的緩沖液：

• 核酸實(shí)驗(yàn)：使用 TAE（Tris-Acetate-EDTA）或 TBE（Tris-Borate-EDTA）緩沖液。

• 蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)：使用 SDS-Tris-Glycine 緩沖液。

二、凝膠制備

2.1 核酸實(shí)驗(yàn)（瓊脂糖凝膠）

1. 準(zhǔn)備瓊脂糖溶液：

• 根據(jù)目標(biāo)片段大小，選擇適合的濃度（通常 0.8%-2%）。

• 例如：分離大片段 DNA（>1000 bp）用 0.8%-1% 的瓊脂糖；分離小片段 DNA（<500 bp）用 1.5%-2%。

• 稱取適量瓊脂糖粉末，加入緩沖液（如 TAE 或 TBE），攪拌均勻。

2. 加熱溶解：

• 在微波爐中加熱瓊脂糖混合液，直至溶解（無(wú)顆粒）。

• 冷卻至約 50℃。

3. 倒入凝膠托架：

• 將凝膠溶液倒入凝膠托架中，插入梳子（形成樣品槽），靜置約 20-30 分鐘直至凝膠固化。

2.2 蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)（聚丙烯酰胺凝膠）

1. 選擇合適的預(yù)制膠或自制膠：

• 使用伯樂(lè)的 Ready Gel（貨號(hào)：1610150）預(yù)制膠，節(jié)省時(shí)間。

• 若自制，按照目標(biāo)分離分子量配置分離膠和濃縮膠，澆注至 Mini-PROTEAN 電泳槽內(nèi)。

2. 安裝凝膠：

• 將固化后的聚丙烯酰胺凝膠固定在伯樂(lè)電泳槽的凝膠夾上。

三、樣品準(zhǔn)備

3.1 樣品處理

• 核酸樣品：

• 使用 DNA 上樣緩沖液（如 6X Loading Dye）與樣品混合。

• 緩沖液通常含有甘油或溴酚藍(lán)，可提高樣品密度并便于追蹤遷移進(jìn)程。

• 蛋白質(zhì)樣品：

• 使用 SDS 上樣緩沖液，將蛋白樣品變性處理（通常需 95℃ 水浴加熱 5 分鐘）。

• 加入染料（如溴酚藍(lán)）以便于電泳過(guò)程中觀察。

3.2 樣品加樣

1. 用加樣槍將樣品緩慢注入凝膠樣品槽，避免氣泡進(jìn)入。

2. 在最后一個(gè)樣品槽中加入分子量標(biāo)準(zhǔn) Marker（DNA Ladder 或蛋白質(zhì) Marker），以對(duì)比目標(biāo)片段大小。

四、電泳運(yùn)行

4.1 安裝電泳槽

1. 將凝膠托架安裝到電泳槽中，確保凝膠正確放置。

2. 加入緩沖液至液面，確保緩沖液覆蓋凝膠并接觸電極。

4.2 連接電源

1. 將電泳槽連接到伯樂(lè) PowerPac 電源（如 1645050）。

2. 確保電極線紅色接正極，黑色接負(fù)極。

4.3 設(shè)置電壓和運(yùn)行時(shí)間

• 核酸實(shí)驗(yàn)：

• 設(shè)置電壓為 50-150 V，運(yùn)行時(shí)間 30-90 分鐘。

• 根據(jù) DNA 片段大小調(diào)整運(yùn)行時(shí)間，染料需運(yùn)行至凝膠 2/3 處。

• 蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)：

• 設(shè)置電壓為 100-200 V，運(yùn)行時(shí)間 30-60 分鐘。

4.4 運(yùn)行監(jiān)控

• 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，觀察溴酚藍(lán)或其他染料的遷移情況。

• 定期檢查緩沖液液位，確保電泳過(guò)程中不會(huì)干涸。

五、實(shí)驗(yàn)完成與結(jié)果處理

5.1 停止電泳

1. 關(guān)閉電源，斷開(kāi)電極線。

2. 小心取出凝膠托架。

5.2 核酸實(shí)驗(yàn)染色

1. 將瓊脂糖凝膠浸入染色液中（如 Ethidium Bromide（EB） 或 SYBR Green）。

• EB 染色：浸泡 15-30 分鐘后脫色。

• SYBR Green：快速染色，靈敏度更高。

2. 使用脫色液（如去離子水）清洗凝膠，去除背景染色。

5.3 蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)染色

1. 將聚丙烯酰胺凝膠浸入染色液（如 考馬斯亮藍(lán) 或 銀染液）。

2. 根據(jù)染色液說(shuō)明，完成染色和脫色步驟。

5.4 結(jié)果觀察

1. 使用伯樂(lè)的成像系統(tǒng)（如 Gel Doc EZ System，貨號(hào)：1708195）觀察凝膠條帶。

2. 分析條帶的分子量和樣品濃度，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

六、清潔與維護(hù)

6.1 清潔設(shè)備

1. 倒掉緩沖液，用去離子水清洗緩沖液槽。

2. 拆卸電極組件，用濕布擦拭干凈。

6.2 檢查組件

• 檢查電極線和電泳槽是否有損壞或老化。

• 如發(fā)現(xiàn)異常，及時(shí)更換或聯(lián)系供應(yīng)商維修。

6.3 存放設(shè)備

• 將設(shè)備存放在干燥、無(wú)塵的環(huán)境中，避免電極組件長(zhǎng)期接觸水分。

七、常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法

7.1 電泳條帶彎曲

• 原因：電場(chǎng)不均或緩沖液液位不足。

• 解決：檢查緩沖液覆蓋是否完，確保電泳槽水平放置。

7.2 條帶擴(kuò)散

• 原因：運(yùn)行時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或緩沖液溫度過(guò)高。

• 解決：縮短運(yùn)行時(shí)間或更換冷卻緩沖液。

7.3 樣品未遷移

• 原因：電極線連接錯(cuò)誤或電壓設(shè)置不當(dāng)。

• 解決：檢查電極連接，確保正負(fù)極接線無(wú)誤。

總結(jié)

伯樂(lè)電泳槽操作簡(jiǎn)單、高效，但需要嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)規(guī)范，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確無(wú)誤。以上使用方法適用于伯樂(lè)的各種電泳槽設(shè)備（如 1658001 和 1658003），如果在使用過(guò)程中遇到特殊問(wèn)題，建議參考產(chǎn)品手冊(cè)或聯(lián)系技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)。通過(guò)規(guī)范操作，您將輕松實(shí)現(xiàn)核酸或蛋白質(zhì)的精準(zhǔn)分離與分析！