植物外源 DNA 導(dǎo)入方法研究成果與走向

農(nóng)桿菌培養(yǎng)：將含有重組 Ti 質(zhì)?；?Ri 質(zhì)粒的農(nóng)桿菌接種到含有相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)基中，在合適溫度（如 28℃）下振蕩培養(yǎng)，使其達到對數(shù)生長期。

植物材料準備：選取合適的植物外植體，如葉片、莖段、子葉等，進行表面消毒處理，以避免雜菌污染影響轉(zhuǎn)化效果。

共培養(yǎng)：將培養(yǎng)好的農(nóng)桿菌與植物外植體在含有乙酰丁香酮等誘導(dǎo)物的培養(yǎng)基上進行共培養(yǎng)，促進農(nóng)桿菌對植物細胞的侵染以及 T - DNA 的轉(zhuǎn)移。

篩選與再生：共培養(yǎng)后，將外植體轉(zhuǎn)移到含有選擇抗生素的培養(yǎng)基上進行篩選，只有成功轉(zhuǎn)化并整合了外源 DNA 的細胞才能生長和分化，進而再生出完整的轉(zhuǎn)基因植株。

微彈制備：將金粉或鎢粉與外源 DNA 溶液混合，通過一定的化學(xué)處理使 DNA 吸附在金屬微粒表面。

植物材料準備：與農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法類似，準備合適的植物外植體或懸浮細胞。

轟擊操作：將制備好的微彈裝入基因槍的發(fā)射裝置中，調(diào)整好參數(shù)（如氣壓、轟擊距離等），對植物材料進行轟擊。

篩選與培養(yǎng)：轟擊后的植物材料在含有選擇抗生素的培養(yǎng)基上進行篩選和培養(yǎng)，使其再生出轉(zhuǎn)基因植株。

外源 DNA 準備：提取和純化含有目的基因的外源 DNA，并將其溶解在合適的緩沖液中。

授粉與處理：在植物開花期進行人工授粉，授粉后一定時間（如 12 - 24 小時），用微量注射器將外源 DNA 溶液注入柱頭或花柱。

種子收獲與篩選：待果實成熟后，收獲種子。對種子進行種植，在后代植株中通過分子生物學(xué)方法（如 PCR、Southern blot 等）篩選出轉(zhuǎn)基因植株。