LC-MS/MS方法 | 測定血漿中的葉酸及代謝物

5-甲酰

四氫葉酸

葉酸

5-甲基

四氫葉酸

色譜柱

Raptor HILIC-Si (貨號：9310A5E)

規(guī)格

50 mm x 3.0 mm ID

粒徑

2.7 µm

柱溫

30 °C

標準品

/ 樣品

溶劑

乙腈（20 mM 乙酸銨）：水 = 80 : 20，含 10 mg / mL 2-Mercaptoethanol

濃度

樣品前處理后最終濃度 6.25 ng / mL

進樣量

5 µL

流動相

A

水 : 乙腈 = 50 : 50，20 mM 乙酸銨

B

水 : 乙腈 = 20 : 80，20 mM 乙酸銨

0.00

3.00

3.20

3.21

5.21

檢測器

MS / MS

離子化方式

ESI +

掃描模式

MRM

儀器

UHPLC

樣品制備

1. 取 380 μL 含有 100μg / mL 2-Mercaptoethanol的血漿（K2EDTA，2x  活性炭處理），加入 20 μL 強化溶液。

2. 渦旋 2 分鐘，以 4000 rpm 離心 2 分鐘。

3. 用 1 mL 甲醇活化 EVOLUTE EXPRESS WAX 30 mg SPE板（Biotage 604-0030-PX01），然后用 1 mL 2% 甲酸）平衡。打開真空泵，將 SPE 板全干燥。

4. 將 400 μL 樣品加載到 SPE 板上并施加真空。

5. 用 1 mL 水清洗 SPE 板,然后抽真空使之全干燥。

6. 以 300 μL 含 5% 氨水的甲醇（含 10 mg / mL 的 2-Mercaptoethanol）作為洗脫溶劑。啟動真空泵進行洗脫。

7. 將提取物在 30°C 下氮氣吹干。

8. 用 200 μL 流動相 B（含 10 mg / mL 2-Mercaptoethanol）復溶，進行上機測試。

* 注：整個樣品制備過程是在昏暗的燈光下進行的。