CHO瞬轉(zhuǎn)表達(dá)基礎(chǔ)培養(yǎng)基適合于不同亞型中國倉鼠卵巢細(xì)胞的高密度懸浮培養(yǎng)

上?；菡\生物提供的CHO 瞬轉(zhuǎn)表達(dá)基礎(chǔ)培養(yǎng)基（Basal Medium）與補(bǔ)料培養(yǎng)基（Feed Medium）是完(空)全化學(xué)成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何動(dòng)物來源的成分，適合于不同亞型中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO-K1 和 CHO-S 細(xì)胞）的高密度懸浮培養(yǎng)，可實(shí)現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達(dá)：培養(yǎng) 7 天表達(dá)量在 500mg/L 左右，14 天表達(dá)量 1000mg/L 左右，部分可達(dá) 2g/L 以上。

上?；菡\生物提供 CHO 細(xì)胞瞬轉(zhuǎn)表達(dá)培養(yǎng)基已完成美國 DMF 登記（DMF039790），更有力的支持客戶需求。

產(chǎn)品描述

Trans PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種分子量為40 kd的陽離子聚合物，它能與核酸形成復(fù)合物，并使該復(fù)合物進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞?？蓮V泛適用于常見細(xì)胞系，如CHO-K1、CHO-S、 HEK293、HEK293T、 Hep G2、Hela、COS-1、COS-7、NIH/3T3和SF9等。該試劑即使在有血清存在的情況下， 它仍然能高效的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。Trans PEI培養(yǎng)基可用于蛋白/抗體瞬時(shí)表達(dá)、腺相關(guān)病毒、慢病毒、疫苗、診斷試劑等領(lǐng)域，采用高密度強(qiáng)化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，可獲得更高的表達(dá)量或滴度。

Trans PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1.優(yōu)(空)越的轉(zhuǎn)染效率

2.重組蛋白的高表達(dá)水平

3.更強(qiáng)的穩(wěn)定性（-20℃保存2年，2-8℃保存6個(gè)月）

4.低細(xì)胞毒性，易于操作

5.可提供GMP級(jí)別

6.10mL/支 0.5 mg/mL

推薦使用說明

產(chǎn)品運(yùn)輸及存儲(chǔ)

運(yùn)輸：常溫或冷鏈運(yùn)輸；

存儲(chǔ)：2~8℃，干燥、避光保存；

有效期：基礎(chǔ)培養(yǎng)基干粉：2 年；

基礎(chǔ)培養(yǎng)基液體：1 年；

補(bǔ)料培養(yǎng)基干粉：2 年；

補(bǔ)料培養(yǎng)基液體：1 年（開封后建議在 3 個(gè)月內(nèi)使用完）。

應(yīng)用范圍

上?；菡\生物提供的培養(yǎng)基可用于 CHO 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、傳代、高密度強(qiáng)化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng)，可實(shí)現(xiàn)

細(xì)胞快速生長(zhǎng)，維持細(xì)胞高活率及蛋白該表達(dá)。

使用指南

細(xì)胞凍存

1．準(zhǔn)備處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)較好的細(xì)胞，且細(xì)胞活率在 90%以上；

2．檢測(cè)活細(xì)胞密度，計(jì)算所需的凍存培養(yǎng)基體積，計(jì)算最終細(xì)胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；

3．準(zhǔn)備好所需的凍存培養(yǎng)基：90%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；

4．設(shè)置離心力 200×g，離心 5 min，用凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞至凍存體積；

5．將懸浮細(xì)胞等分保存至適宜規(guī)格的細(xì)胞凍存管中；

6．將細(xì)胞凍存管置于程序降溫盒中，按照降溫標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行降溫；

7． 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中保存。

細(xì)胞復(fù)蘇

1．提前打開水浴鍋，并設(shè)置溫度至 36.5℃~37.0℃；

2．將細(xì)胞從液氮罐中移出后，快速在水浴鍋中融化冷凍的細(xì)胞（＜3 min）；

3．將冷凍管中的細(xì)胞液全部轉(zhuǎn)移到 125 mL 含有 30 mL 預(yù)溫過的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的搖瓶中；

4．置于 36.5~37.0℃，5~8% CO 2 ，轉(zhuǎn)速 120 rpm（軌道振幅 50 mm）的搖床中培養(yǎng)；

5． 細(xì)胞至少傳代 2 次，待細(xì)胞完(空)全復(fù)蘇且活率在 90%以上，可按計(jì)劃進(jìn)行后續(xù)操作。

細(xì)胞傳代

1．將基礎(chǔ)培養(yǎng)基放入 36.5~37.0℃條件下預(yù)熱 20 min；

2．檢測(cè)活細(xì)胞密度，按接種密度為 0.3×10 6 cells/mL 的最終傳代體積，計(jì)算所需種子液量；

3．無菌轉(zhuǎn)移所需量的種子液，添加至含所需體積的已預(yù)熱的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的搖瓶中；

4．將搖瓶放入溫度 36.5~37.0℃，120 rpm（振幅 50 mm）（搖瓶底面積增大，需減小搖床轉(zhuǎn)速），

5%~8% CO 2 的細(xì)胞培養(yǎng)搖床中進(jìn)行培養(yǎng)；

5．每 3 天用新鮮的培養(yǎng)基按上述步驟進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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