原代細胞實驗操作過程

培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）或明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)內(nèi)皮細胞樣

傳代特性可傳1-2代；不建議多次傳代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔外周血來源內(nèi)皮祖細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

人外周血淋巴細胞是一種懸浮細胞，細胞形態(tài)呈圓形，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細胞不增殖；不傳代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 懸浮細胞處理

1）收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中，用PBS清洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；

2）1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細胞沉淀；

3）加入5mL新鮮培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞；將分散好的細胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4）若遇到懸浮細胞團塊較大，無法機械吹散時，向步驟2）中細胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37℃溫浴2-3min，消化結(jié)束后，加入胰

酶抑制劑(或血清）終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細胞；1200rpm離心5min，棄上清，

收集細胞沉淀；

5）加入5mL新鮮培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻；按傳代比例進行接種傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

6）待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察，用于實驗；之后再按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 消化過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

5. 該細胞只可用于科研。

特殊注意事項

6. 此細胞為懸浮細胞，請注意不要直接倒掉，造成損失；懸浮細胞因多數(shù)胞體較小，離心收集時，請注意懸液中細胞是否收集，可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時間3-5min，增加細胞獲取量。

備注：由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考