手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的基本原理是利用DNA聚合酶在PCR過程中合成新DNA鏈的特性，結(jié)合一種熒光標(biāo)記的探針或染料，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號的增加來測量PCR反應(yīng)的進(jìn)行程度。在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實(shí)時(shí)監(jiān)測整個PCR進(jìn)程。隨著反應(yīng)時(shí)間的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。
由于在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時(shí)期，模板的Ct值(即樣品到達(dá)域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù))和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，所以可以作為定量的依據(jù)。域值應(yīng)設(shè)定在使指數(shù)期的擴(kuò)增效率為最大，這樣可以獲得最準(zhǔn)確、可重復(fù)性的數(shù)據(jù)。如果同時(shí)擴(kuò)增的還有標(biāo)有相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，線性回歸分析將產(chǎn)生一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以用來計(jì)算未知樣品的濃度。
使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的一般操作流程包括：
設(shè)計(jì)引物和探針：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，選擇合適的基因序列，設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針。
準(zhǔn)備樣本：提取待檢測的核酸樣本，如DNA或RNA，并確保樣本的質(zhì)量和純度。
準(zhǔn)備反應(yīng)體系：將所需的試劑和樣本加入PCR反應(yīng)管中，組成反應(yīng)體系。包括引物、探針、酶、緩沖液、dNTPs和核酸模板等。
設(shè)置儀器參數(shù)：打開儀器，選擇合適的PCR程序，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求設(shè)置溫度、時(shí)間、循環(huán)次數(shù)等參數(shù)。同時(shí)，設(shè)置熒光檢測通道和參數(shù)。
放置樣本：將準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管放入儀器的樣品槽中，確保放置正確且穩(wěn)固。
啟動程序：確認(rèn)設(shè)置無誤后，啟動PCR程序。儀器將按照設(shè)定參數(shù)進(jìn)行溫度循環(huán)和熒光檢測。
實(shí)時(shí)監(jiān)測與分析：通過儀器顯示屏實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號變化，觀察擴(kuò)增曲線形狀和趨勢。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，儀器自動生成結(jié)果，包括擴(kuò)增曲線、Ct值等。使用軟件對結(jié)果進(jìn)行分析和處理。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心