Cistro磁力架的應(yīng)用之IP免疫沉淀篇

  免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP)有廣義和狹義之分，廣義的免疫沉淀包括特定目標(biāo)蛋白質(zhì)免疫沉淀（IP）、蛋白質(zhì)復(fù)合物免疫沉淀（Co-IP）、染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）和RNA免疫沉淀（RIP），狹義的免疫沉淀是指特定目標(biāo)蛋白質(zhì)的免疫沉淀，也就是常說(shuō)的IP實(shí)驗(yàn)，IP實(shí)驗(yàn)可從含有多種不同蛋白質(zhì)的樣品中分離濃縮特定的蛋白質(zhì)。

免疫沉淀原理

免疫沉淀是一種利用特異性抗體結(jié)合抗原，并通過(guò)沉淀富集的方式從復(fù)雜的樣本中分離出目標(biāo)蛋白的方法。主要用于從復(fù)雜的生物樣本中分離和純化單一特定蛋白質(zhì)，依賴于抗體對(duì)目標(biāo)蛋白的特異性識(shí)別并形成抗原-抗體復(fù)合物，然后通過(guò)物理方法（如瓊脂糖珠或磁珠 ）將這些復(fù)合物沉淀下來(lái)，再結(jié)合Western blot（WB）或質(zhì)譜（mass spectrum，MS）對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行檢測(cè)分析，即可對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定性/定量分析。

磁珠的優(yōu)勢(shì)

l 結(jié)合能力和得率

目前磁性微粒已經(jīng)大幅取代瓊脂糖，成為免疫沉淀和其他微量親和純化方法的支持物。磁性微粒是球形固體，抗體結(jié)合于每個(gè)磁珠的表面。雖然磁珠不具有多孔中心以增加結(jié)合能力的優(yōu)勢(shì)，但它們明顯小于瓊脂糖微珠（直徑0.2-4 μm），可提供足夠大的總表面積以滿足高容量的抗體結(jié)合，并且抗體很少會(huì)在溫和的洗滌步驟（磁體）中丟失。因此，盡管磁珠的抗體結(jié)合能力低于瓊脂糖，但最終的抗原得率通常與瓊脂糖相等或比瓊脂糖更高。

l 可重復(fù)性和純度

使用瓊脂糖時(shí)，難以在不破壞和靠近一些沉淀樹(shù)脂的前提下移除緩沖液。使用磁珠時(shí)，強(qiáng)力磁力架可將磁珠固定在管壁，所以無(wú)需碰觸磁珠沉淀即可移除緩沖液。此外，瓊脂糖通常需要較長(zhǎng)的孵育時(shí)間（使溶液向內(nèi)部空間的擴(kuò)散）和預(yù)純化步驟（控制非目標(biāo)蛋白的非特異性結(jié)合）。由于所有的相互作用均發(fā)生在磁珠的外表面，并且磁珠的尺寸更均一，所以磁珠的可重復(fù)性和純度通常高于瓊脂糖。

l 簡(jiǎn)單、快速和自動(dòng)化

瓊脂糖和磁珠之間的上述差異正是目前免疫沉淀優(yōu)先選擇磁珠的原因。由于瓊脂糖免疫沉淀需要較長(zhǎng)的孵育時(shí)間、預(yù)純化步驟和多次離心，所以其需要大量手動(dòng)操作，總時(shí)間為1-1.5小時(shí)。相反，一次磁珠免疫沉淀使用只需大約30分鐘即可完成。此外，由于磁性分離不需要離心，在處理多個(gè)樣品時(shí)更簡(jiǎn)單、更快速，更適合自動(dòng)化。

CISTRO磁力架

CISTRO--一家把磁力架質(zhì)量做到的廠家能夠?yàn)槟?/span>IP實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航，推出的各類規(guī)格磁力架，能夠幫助磁珠快速?gòu)母鞣N液體樣本中分離，您可根據(jù)樣本量選擇不同的磁力架