厭氧培養(yǎng)箱菌種置入操作流程及培養(yǎng)方法

厭氧培養(yǎng)箱菌種置入操作流程及培養(yǎng)方法

?一、菌種置入操作流程?

?準(zhǔn)備工作?

檢查取樣室內(nèi)門是否關(guān)緊，確保操作室與外界隔絕?。

清潔取樣室及操作手套，避免污染；確認(rèn)鈀催化劑和干燥劑活性（若失效需更換或再生）?。

?菌種傳遞?

打開(kāi)取樣室外門，將菌種放入取樣室后立即關(guān)閉外門?。

?氣體置換流程?：

?抽真空?：?jiǎn)?dòng)真空泵，抽真空至壓力≥66kPa（500mmHg），停止后關(guān)閉真空閥?。

?充氮?dú)?：打開(kāi)氮?dú)忾y向取樣室充入氮?dú)庵翂毫謴?fù)常壓，重復(fù)抽真空-充氮?dú)獠僮?次，置換殘留氧氣?。

?混合氣體補(bǔ)充?：最后一次充氣時(shí)改用混合氣體（N? 85%、H? 10%、CO? 5%），流量控制在10ml/min?。

?環(huán)境驗(yàn)證?

使用美蘭指示劑檢測(cè)氧濃度：若指示劑保持無(wú)色，表明操作室內(nèi)氧濃度≤1ppm，達(dá)到厭氧標(biāo)準(zhǔn)?。

?二、培養(yǎng)方法及環(huán)境維持?

?參數(shù)設(shè)置?

設(shè)置恒溫培養(yǎng)溫度（常規(guī)35–37℃），控溫精度需達(dá)±0.3℃?。

啟動(dòng)鈀催化劑和除氧裝置，持續(xù)吸附微量氧氣并維持濕度<10%?。

?培養(yǎng)操作?

通過(guò)手套操作孔進(jìn)行菌種接種，避免手套破損導(dǎo)致氧氣滲入?。

將接種后的培養(yǎng)基平皿或試管置于操作室內(nèi)的恒溫區(qū)域，確保風(fēng)道暢通以保持溫度均勻?。

?長(zhǎng)期培養(yǎng)維護(hù)?

?氣體補(bǔ)充?：每日向操作室持續(xù)通入微量混合氣體（10ml/min），通過(guò)鈀催化反應(yīng)消耗殘留氧氣?。

?環(huán)境監(jiān)測(cè)?：每日檢查美蘭指示劑顏色變化，若變藍(lán)需重新置換氣體?。

?耗材更換?：每周再生鈀催化劑（160℃烘烤2小時(shí)），每1–2年更換一次；干燥劑和活性炭每1–2周更換?。

?三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)?

?安全操作?

混合氣體含氫氣，操作時(shí)遠(yuǎn)離火源并確保設(shè)備接地良好?。

傳遞菌種時(shí)嚴(yán)格遵循“抽真空-充氮?dú)狻绷鞒?，避免氧氣殘?。

?設(shè)備維護(hù)?

定期校準(zhǔn)溫度傳感器和氧濃度檢測(cè)儀，防止數(shù)據(jù)偏差?13。

停止使用時(shí)，運(yùn)行40℃以上烘干程序2小時(shí)并開(kāi)門通風(fēng)，防止箱內(nèi)冷凝水積聚?。

?異常處理?

若氧濃度異常升高，立即暫停實(shí)驗(yàn)，排查氣路泄漏或催化劑失效問(wèn)題