微管蛋白(純度>99%):豬腦--微管蛋白是從豬腦中提取的,采用Shelanski等人的方法(1)進(jìn)行純化,并通過陽離子交換色譜進(jìn)一步純化至>99%純度。微管蛋白以白色凍干粉的形式提供。
微管蛋白(純度>99%):豬腦w全具有聚合活性,采用z利技術(shù)凍干,以提高穩(wěn)定性和使用壽命。T240在4°C干燥條件下可穩(wěn)定保存1年。
艾美捷微管蛋白(純度>99%):豬腦(T240-A-T)生物活性:
1單位微管蛋白定義為5.0 mg純化蛋白(通過Precision Red高級蛋白定量試劑貨號ADV02測定)。T240的生物活性通過微管蛋白聚合檢測進(jìn)行評估。通過觀察微管蛋白溶液在340 nm處的光密度增加,可以跟蹤微管蛋白聚合為微管的能力。在37°C下,使用0.8 cm光程(1/2面積96孔板中180 µL樣本體積)的分光光度計,5 mg/ml微管蛋白溶液在通用微管蛋白緩沖液中加入5%甘油和1 mM GTP,應(yīng)在30分鐘內(nèi)達(dá)到0.75-1.10的OD340 nm讀數(shù)。
需要注意的是,不含甘油的微管蛋白在G-PEM緩沖液中直到非常高濃度(>10 mg/ml)才會聚合,即使在這種濃度下,聚合速度也相對較慢。通過添加聚合促進(jìn)化合物(例如甘油、紫杉醇或DMSO),可以在低濃度下實現(xiàn)不含甘油的微管蛋白的高效聚合。
純度:純度通過SDS-PAGE凝膠上蛋白質(zhì)的掃描分光光度法測定。樣品純度>99%。
圖1:20 µg的T240蛋白在10% SDS-PAGE凝膠上進(jìn)行電泳分離,并用考馬斯亮藍(lán)染色。蛋白質(zhì)定量使用Precision Red蛋白定量試劑(貨號ADV02)進(jìn)行。
微管蛋白(純度>99%):豬腦用途包括:
1抗微管蛋白配體的IC50和EC50測定。
2微管結(jié)合研究。
3微管蛋白單體結(jié)合研究。
4組蛋白去乙?;?span style="font-family: Calibri;">6(HDAC6)研究。
5微管激活的驅(qū)動蛋白ATP酶檢測。
文獻(xiàn)參考:
Shelanski, M. L., et al. (1973). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 70, 765-768
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