普諾賽細(xì)胞學(xué)堂 | 外泌體分離不再難!普諾賽®四大試劑盒全面解析
文章來(lái)源:procell
外泌體作為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì),其高純度、高回收率的分離對(duì)下游功能分析、組學(xué)檢測(cè)及疾病診斷至關(guān)重要。然而,傳統(tǒng)外泌體提取方法往往面臨設(shè)備要求高、操作流程復(fù)雜等挑戰(zhàn)。為此,普諾賽®針對(duì)性開發(fā)了多種分離方案,以滿足不同樣品類型與研究需求。
在上期細(xì)胞學(xué)堂中,我們梳理了常用的外泌體分離方法,本期我們將進(jìn)一步聚焦普諾賽®推出的四款外泌體分離試劑盒,詳細(xì)解析其核心原理、操作流程、注意事項(xiàng)及優(yōu)勢(shì),助力您挑選最-適合的產(chǎn)品。
微量外泌體分離試劑盒(磁珠法)

貨號(hào):
P-CA-501
試劑盒組分:
Exosome Beads、
Solution A、
Elution Buffer
原理概述
利用自主研發(fā)的均相液體磁珠(Exosome Beads),通過(guò)磁珠特異性結(jié)合外泌體而不吸附雜質(zhì),以及磁性分離技術(shù),達(dá)到高純度和高回收率的分離效果。
操作流程
1
樣品預(yù)處理:差速離心(300 g,5 min→2000 g,10 min→14000 g,30 min)逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒;
2
富集外泌體:向去除了保護(hù)液的磁珠中加入預(yù)處理后的樣品,置于搖床室溫旋轉(zhuǎn)孵育30 min;
3
洗滌:置于磁力架上,靜置30s,棄上清,并用Solution A洗滌,重復(fù)2次,保留磁珠;
4
分離外泌體:加入Elution Buffer后置于搖床室溫旋轉(zhuǎn)孵育30 min;置于磁力架上,靜置30s,轉(zhuǎn)移上清到新的離心管中,該上清即為分離的外泌體。
注意事項(xiàng)
在某些樣品中,磁珠結(jié)合外泌體時(shí)可能會(huì)結(jié)團(tuán),但不影響分離效果,無(wú)需處理;
完成分離后的外泌體不宜長(zhǎng)時(shí)間在Elution Buffer中保存。若長(zhǎng)時(shí)間保存,可使用超濾管將溶液置換為PBS。
優(yōu)勢(shì)
分離的外泌體純度高且完整性好,適合分離微量或珍貴樣品中外泌體;分離操作簡(jiǎn)便,僅需常規(guī)磁力架,無(wú)需特殊設(shè)備,高通量,能同時(shí)處理多個(gè)樣本,兼容自動(dòng)化操作。
通用外泌體分離試劑盒(SEC法)

貨號(hào):
P-CA-502/P-CA-503
試劑盒組分:
Exosome Purification Column、
Column Adapter
注:P-CA-502和P-CA-503僅產(chǎn)品規(guī)格和樣品上樣量有區(qū)別,其他操作是一致的。
原理概述
基于分子排阻色譜原理,利用外泌體純化柱(Exosome Purification Column)中的多孔凝膠顆粒作為填料,這些填料顆粒根據(jù)顆粒大小形成不同的孔道,使得在PBS緩沖液流動(dòng)的過(guò)程中,將樣品中外泌體與其他不同尺寸的顆粒進(jìn)行分離。
操作流程
1
樣品預(yù)處理:差速離心(300 g,5 min→2000 g,10 min→14000 g,30 min)逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒;
2
純化柱預(yù)處理:將純化柱在室溫平衡30 min,檢查并排除空氣,PBS平衡純化柱;
3
外泌體分離:待樣品完-全進(jìn)入純化柱,分批加入0.5 mL PBS,并收集流穿液,其中4-8號(hào)管(P-CA-502)或8-12號(hào)管(P-CA-503)中收集的流穿液即為分離的外泌體;
4
純化柱維護(hù):先后加入PBS和20%乙醇清洗純化柱,再將純化柱加滿20%乙醇密封,于4℃保存。
注意事項(xiàng)
本操作中使用的PBS和20%乙醇建議現(xiàn)配現(xiàn)用,同時(shí)經(jīng)0.2 μm濾膜過(guò)濾、超聲或真空脫氣,避免造成純化柱出現(xiàn)大量氣泡,影響分離效果;
純化柱使用前需充分平衡至室溫(18-25℃),溫度過(guò)低或過(guò)高,都會(huì)影響外泌體分離效果;
純化柱中間不能有氣泡,使用前后需認(rèn)真檢查,避免影響外泌體分離效果;
純化柱可以反復(fù)利用,但多次使用會(huì)影響純化效果,建議重復(fù)使用不超過(guò)5次;
當(dāng)分離的外泌體進(jìn)行NGS或者其他組學(xué)分析時(shí),為避免交叉污染,建議每個(gè)樣品使用一支新的純化柱。
優(yōu)勢(shì)
分離的外泌體純度高、回收率高;操作簡(jiǎn)單,無(wú)需專業(yè)的純化設(shè)備,可獲得無(wú)蛋白污染、用于鑒定檢測(cè)和功能研究的高質(zhì)量外泌體。
離心柱式外泌體分離試劑盒

貨號(hào):
P-CA-504
試劑盒組分:
Spin Column 01、
Collection Tubes (2 mL)、
Solution A
原理概述
離心柱中裝填的介質(zhì)能無(wú)差別吸附雜質(zhì)而不結(jié)合外泌體,利用離心力實(shí)現(xiàn)樣品中外泌體與雜質(zhì)的分離。此法不僅可快速分離外泌體,還可去除游離的外泌體標(biāo)記染料。
操作流程
1
樣品預(yù)處理:差速離心(300 g,5 min→2000 g,10 min→14000 g,30 min)逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒;
2
離心柱預(yù)處理:棄去離心柱(Spin Column 01)上層的保護(hù)液體,加入Solution A離心洗滌;
3
外泌體分離:將預(yù)處理后的樣品加入離心柱中,離心獲得的洗脫液即為分離的外泌體。
注意事項(xiàng)
單個(gè)離心柱最大上樣體積為500 μL,若樣品體積超過(guò)500 μL,則建議試用50 kDa超濾管濃縮樣品至0.5 mL,注意濃縮體積不超過(guò)20倍;
對(duì)高粘度樣品,如血漿、血清、胸腹水等樣本,可用等體積去離子水稀釋再加入到離心柱中;
對(duì)雜質(zhì)較多的樣品,如血漿、血清、胸腹水、牛奶等樣本,建議用PBS稀釋10倍后,經(jīng)過(guò)50 kDa超濾管濃縮10倍;然后加入剩余液體10倍體積的PBS,超濾濃縮10倍后,再用離心柱分離外泌體;
離心法分離時(shí),控制離心力在300-500×g;若樣品粘度大,可適當(dāng)增加離心力,以確保分離效果。
優(yōu)勢(shì)
外泌體分離操作簡(jiǎn)便、高純度和高富集量,無(wú)需磁力架、超速離心機(jī)等特殊設(shè)備;能去除游離的外泌體標(biāo)記染料。
外泌體分離試劑盒(沉淀法)

貨號(hào):
P-CA-505
試劑盒組分:
Exosome Precipitation Solution、
Solution A
原理概述
通過(guò)添加特定的試劑(如Exosome Precipitation Solution),使樣品中的外泌體迅速聚集沉降,再通過(guò)離心收集沉淀中的外泌體。
操作流程
1
樣品預(yù)處理:差速離心(300 g,5 min→2000 g,10 min→14000 g,30 min)逐步去除樣品中細(xì)胞、細(xì)胞碎片及大體積顆粒;
2
沉淀外泌體:血清/血漿樣品按照樣品:Solution A:Exosome Precipitation Solution=2:2:1的體積比混勻;細(xì)胞培養(yǎng)上清/尿液樣品按照樣品:Exosome Precipitation Solution=4:1的體積比混勻;室溫孵育30 min或4℃孵育過(guò)夜;
3
外泌體回收:高速離心,吸棄上清,向沉淀中加入Solution A重懸沉淀,再次離心收集上清,即為分離的外泌體。
注意事項(xiàng)
注意樣品與各試劑的體積比,嚴(yán)格按照推薦比例操作;
細(xì)胞培養(yǎng)上清或尿液樣品體積過(guò)大,可以先進(jìn)行濃縮再進(jìn)行沉淀;
操作要輕柔,吸棄上清時(shí)避免吸到沉淀影響外泌體得率;
實(shí)驗(yàn)時(shí)間允許情況下,為保證外泌體分離的高回收率,推薦4℃孵育過(guò)夜。
優(yōu)勢(shì)
適用樣品廣,外泌體回收率高、重復(fù)性好;無(wú)需特殊設(shè)備,操作簡(jiǎn)便快速,能同時(shí)處理多個(gè)樣本。
希望這篇關(guān)于外泌體分離試劑盒的選用指南能幫助到您!更多細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)干貨,請(qǐng)持續(xù)關(guān)注細(xì)胞學(xué)堂專欄~

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