如何選擇最佳的 qPCR 探針化學(xué)試劑

讓應(yīng)用程序成為您在 LNA、MGB 和 BHQplus 之間做出決定的指南 

qPCR 探針的多種不同填料為科學(xué)家在檢測開發(fā)過程中提供了豐富的選擇。鎖定核酸 （LNA）、小溝結(jié)合物 （MGB） 和 BHQplus™ 探針均可增強雙鏈體穩(wěn)定性，這有助于您的檢測獲得高信噪比，同時保持寡核苷酸長度相當(dāng)緊湊。它們還能夠更好地適應(yīng)具有挑戰(zhàn)性的靶標(biāo)，如富含 A-T 的序列。但每種探針類型的化學(xué)性質(zhì)意味著您將獲得最佳的檢測性能 – 信噪比、檢測限 （LOD） 等。– 當(dāng)您將探頭類型與應(yīng)用程序匹配時。

MGB 探針適用于檢測 SNP 和困難的基因表達靶標(biāo)

什么是 MGB 探頭？

MGB 探針的長度通常為 8-30 個堿基，5' 端有一個熒光團，3' 端有一個淬滅基團。3' 末端也連接到一個化學(xué)部分 - MGB - 該化學(xué)部分與雙鏈 DNA 的小溝非共價結(jié)合。

MGB 探針如何工作？ 使用 MGB 探針時，MGB 與探針-靶結(jié)構(gòu)的小溝的結(jié)合增強了雙鏈體的穩(wěn)定性。

圖 1.MGB 探針是雙標(biāo)記的 5′ 水解探針，由 5′ 熒光報告染料和 3′ Eclipse 暗淬滅基團 （EDQ） 組成，與 MGB 部分偶聯(lián)。

MGB 探針適合哪些應(yīng)用？什么時候應(yīng)該使用 MGB 探頭？

由于 MGB 附著在寡核苷酸的末端，因此易于設(shè)計 - 只需使用與目標(biāo)區(qū)域互補的寡核苷酸序列即可。這使得 MGB 探針成為檢測 SNP 和困難的基因表達靶標(biāo)（例如富含 A-T 含量的序列）的理想選擇。

然而，雖然設(shè)計可能很簡單，但熔融溫度 （Tm） 無法進行微調(diào)。

LNA 探針是需要高特異性和靈敏度的應(yīng)用的理想選擇

什么是 LNA？

LNA，也稱為橋式核酸，是經(jīng)過修飾的堿基，其中糖的 2' 氧和 4' 碳與亞甲基橋共價連接。

對用于 SYBR Green 檢測的 LNA 增強引物感興趣？除了提供 LNA 探針外，Biosearch Technologies 還合成具有內(nèi)部 LNA 修飾的定制寡核苷酸。

BHQplus 探針是需要高特異性和靈敏度的應(yīng)用的替代選擇

什么是 BHQplus 探頭？

與 LNA 探針一樣，BHQplus 探針利用化學(xué)修飾的單體來增強探針-靶標(biāo)雙鏈體的穩(wěn)定性和特異性。

然而，BHQplus 探針中使用的專有化學(xué)成分與 LNA 不同，這為科學(xué)家提供了另一種探針化學(xué)選擇。

BHQplus 探頭適合哪些應(yīng)用？什么時候應(yīng)該使用 BHQplus 探頭？

與 LNA 探針一樣，BHQplus 探針非常適合需要高靈敏度和特異性的應(yīng)用。它們?yōu)?LNA 探頭技術(shù)提供了一種更易于設(shè)計且價格更具競爭力的替代方案，當(dāng)您不需要微調(diào)探頭性能時，它是一個不錯的選擇。

在探針化學(xué)的選擇中進行選擇

雖然我們已經(jīng)強調(diào)了使每種探針化學(xué)成分大放異彩的具體優(yōu)勢，但其中有很多重疊，您可能希望在檢測開發(fā)過程中試用每種類型的探針。