NIBSC標(biāo)準(zhǔn)品 09/138 遺傳參考小組(用于通過RQ-PCR定量BCR-ABL易位)

品牌：英國NIBSC標(biāo)準(zhǔn)品

CRM code（貨號）：09/138

英文名稱：Genetic Reference Panel, for the quantitation of BCR-ABL translocation by RQ-PCR (1st I.S.)

描述：遺傳參考小組，用于通過RQ-PCR定量BCR-ABL易位

產(chǎn)品用途：

       2009年，世界衛(wèi)生組織（世界衛(wèi)生組織；NIBSC產(chǎn)品代碼09/138）生物標(biāo)準(zhǔn)化專家委員會（ECBS）成立了第一個世界衛(wèi)生組織BCR-ABL1 mRNA定量國際遺傳參考小組[1]。該小組由四個單獨編碼的標(biāo)準(zhǔn)品/安瓿組成，每個安瓿都含有凍干細(xì)胞。根據(jù)所使用的對照基因，每種標(biāo)準(zhǔn)在國際標(biāo)度（BCR-ABLIS）上對BCR-ABL1都有不同的定義值。它們一起用作試劑盒、分析和二級標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)的主要標(biāo)準(zhǔn)（見第7節(jié)）。材料不應(yīng)被用于任何其他用途。請注意，這些材料僅在國際標(biāo)準(zhǔn)（IS）的0.01%至10%范圍內(nèi)用于BCR-ABL1 mRNA檢測。它們尚未被驗證用于其他直接應(yīng)用，例如IS測量>10%，或直接確定分析靈敏度<0.01%，盡管這些可以通過推導(dǎo)二級標(biāo)準(zhǔn)來確定（見第7節(jié)）。這些材料包含BCR-ABL1 e14a2轉(zhuǎn)錄本（也稱為b3a2）；在使用前，應(yīng)驗證其對最終用戶測定中包括BCR-ABL1 e13a2（b2a2）在內(nèi)的其他轉(zhuǎn)錄物的定量適用性，例如通過確保轉(zhuǎn)錄物的PCR擴(kuò)增同樣有效。

NIBSC標(biāo)準(zhǔn)品 09/138 遺傳參考小組(用于通過RQ-PCR定量BCR-ABL易位)

該小組在一項涉及10個實驗室的國際合作研究中進(jìn)行了測試，并使用三種zui常用的對照基因獲得了4種主要標(biāo)準(zhǔn)中每種的BCR-ABL1IS平均值。

使用說明：

在復(fù)溶之前，不應(yīng)嘗試稱量凍干材料的任何部分。

在繼續(xù)之前，請閱讀第3-5頁上建議的測定和二級標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)方法。

如果您正在校準(zhǔn)二級標(biāo)準(zhǔn)品，請?zhí)崛NA，制備cDNA，并在與一級標(biāo)準(zhǔn)品同時測試該cDNA。這將使您能夠確定二級標(biāo)準(zhǔn)的IS值。

a.按照第6節(jié)所述打開安瓿。上面。

b.在室溫下用1ml Trizol、600µl RLT緩沖液或其他RNA提取系統(tǒng)的等效物復(fù)溶每種凍干材料。

c.確保用移液管jian端或針頭反復(fù)抽吸以溶解所有細(xì)胞。孵育5分鐘。

d.將每個安瓿的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到無核酸酶試管中。

e.用你常用的方法從4種材料中提取RNA。

f.使用您常用的方法為4種RNA材料中的每一種制備cDNA。（如果按照建議的方法，從每種RNA材料中制備2批cDNA；見第3頁）。

g.使用您常用的方法確定cDNA材料的BCR-ABL1/對照基因值百分比。

h.通過分析這些材料的觀察值與預(yù)期值，確定BCR-ABL1測定的校正系數(shù)，以報告IS。

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