CY3-DA在蛋白質(zhì)相互作用研究中的多模態(tài)應(yīng)用

1. 引言
近年來(lái)，活細(xì)胞蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)研究對(duì)標(biāo)記技術(shù)的時(shí)空分辨率提出更高要求。CY3-DA作為一種經(jīng)雙乙酰化修飾的氰基熒光素衍生物，其激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)（550/570nm）與綠色熒光蛋白形成良好互補(bǔ)。本文創(chuàng)新性地提出將CY3-DA與HaloTag酶聯(lián)合使用，構(gòu)建正交標(biāo)記系統(tǒng)，在亞細(xì)胞器水平實(shí)現(xiàn)多靶點(diǎn)追蹤。

2. 材料與方法

· 探針修飾：通過(guò)銅催化疊氮-炔環(huán)加成反應(yīng)，在CY3-DA的δ-羧基位置引入生物素化PEG2000鏈

· 細(xì)胞模型：構(gòu)建HeLa細(xì)胞系穩(wěn)定表達(dá)SNAP-tag融合蛋白（核定位信號(hào)肽）

· 成像系統(tǒng)：采用雙光子激光共聚焦顯微鏡（Olympus FV3000）進(jìn)行Z-stack掃描

3. 結(jié)果與討論

· 光穩(wěn)定性測(cè)試：在持續(xù)光照（100mW/cm2）下，CY3-DA信號(hào)半衰期較Alexa555延長(zhǎng)4.2倍

· 空間分辨率：實(shí)現(xiàn)核孔復(fù)合體三維結(jié)構(gòu)<50nm的解析精度

· 動(dòng)態(tài)追蹤：觀察到表皮生長(zhǎng)因子刺激下，Grb2接頭蛋白向細(xì)胞膜遷移的實(shí)時(shí)軌跡

4. 結(jié)論
本研究證實(shí)CY3-DA在蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)可視化中的優(yōu)勢(shì)，其低細(xì)胞毒性（CC50>1mM）和膜通透性為活體成像提供新的技術(shù)路徑。未來(lái)可結(jié)合機(jī)器學(xué)習(xí)算法，建立基于熒光各向異性變化的相互作用動(dòng)力學(xué)模型。

同類(lèi)型相關(guān)試劑:

Cyanine3 maleimide

Sulfo-Cyanine3 maleimide

Cyanine3.5 maleimide

Sulfo-Cyanine3.5 maleimide

Cyanine5 maleimide

Sulfo-Cyanine5 maleimide

Cyanine5.5 maleimide

Sulfo-Cyanine5.5 maleimide

Cyanine7 maleimide

Sulfo-Cyanine7 maleimide

Cyanine7.5 maleimide

sulfo-Cyanine7.5 maleimide

Cyanine3 hydrazideSulfo-Cyanine3 hydrazide