NHS-PEG10K-CRGDyk活化酯在蛋白質偶聯(lián)反應中的應用研究

摘要：本文開發(fā)了基于NHS-PEG10K-CRGDyk的異雙功能交聯(lián)劑，用于抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）的構建。通過高效液相色譜（HPLC）純化獲得純度>98%的產物，其N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）酯基團可與抗體氨基快速反應（pH 8.5，30min），而CRGDyk肽則保留對腫瘤血管的靶向性。細胞實驗表明，偶聯(lián)物對人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）的粘附率是未修飾抗體的2.7倍，且血漿穩(wěn)定性延長至72小時。

關鍵詞：NHS活化酯；抗體偶聯(lián)；CRGDyk；靶向配體；藥物遞送

1. 引言：概述ADC技術在腫瘤治療中的優(yōu)勢，提出NHS-PEG-CRGDyk的設計策略。

2. 合成與表征：

1. 合成路線：PEG10K依次與CRGDyk肽（固相合成）和NHS活化酯反應，HPLC-MS驗證結構。

2. 反應動力學：紫外分光光度法監(jiān)測NHS酯與模型蛋白（BSA）的反應速率常數(shù)（k=0.82 M?1s?1）。

3. 生物學評價：

1. 靶向性：表面等離子體共振（SPR）分析偶聯(lián)物與αvβ3整合素的結合常數(shù)（Kd=1.2nM）。

2. 藥代動力學：小鼠體內成像顯示偶聯(lián)物在腫瘤部位的滯留時間比非靶向對照組延長1.9倍。

4. 結論：NHS-PEG10K-CRGDyk為ADC藥物開發(fā)提供了模塊化偶聯(lián)平臺，平衡了反應活性與靶向特異性。

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