營養(yǎng)肉湯(NB)的制備和使用方法及安全操作規(guī)范！

一、背景

營養(yǎng)肉湯(NB)也被稱為營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或Nutrient Broth，是一種常用的細菌培養(yǎng)基，用于細菌的傳代、培養(yǎng)、轉(zhuǎn)種、復(fù)壯和增菌等。

營養(yǎng)肉湯(NB)的主要成分包括蛋白胨、牛肉浸粉（或牛肉膏粉）和氯化鈉。其中，蛋白胨和牛肉浸粉為微生物生長提供氮源、B族維生素、氨基酸和其他生長因子，同時也提供碳源；氯化鈉則用于維持培養(yǎng)基的滲透壓。

在制備營養(yǎng)肉湯(NB)時，需要將適量的培養(yǎng)基粉末溶解在蒸餾水中，并加熱溶解。然后，將溶液分裝到三角瓶或試管中，進行高壓滅菌處理，備用。

營養(yǎng)肉湯(NB)適合營養(yǎng)需求較高的細菌的生長，但不適用于苛養(yǎng)型微生物。它廣泛用于食品、牛奶、奶制品的微生物檢測，以及其他需要一般細菌培養(yǎng)的實驗中。

營養(yǎng)肉湯(NB)混合后微熱溶解，然后調(diào)整pH值至7.4-7.6，濾清后分裝并在116℃下滅菌30分鐘。滅菌后的營養(yǎng)肉湯應(yīng)該是淡黃色透明無沉淀的溶液，pH值應(yīng)為7.2-7.4。這種培養(yǎng)基廣泛用于細菌的培養(yǎng)，尤其是那些需要豐富營養(yǎng)才能良好生長的細菌。

二、營養(yǎng)肉湯的制備和使用需要遵循以下安全操作規(guī)范：

1、穿戴防護設(shè)備：在制備過程中，應(yīng)穿戴實驗服、護目鏡、手套等防護設(shè)備，以防止培養(yǎng)基飛濺到皮膚或眼睛中。

2、確保實驗環(huán)境清潔：實驗環(huán)境應(yīng)保持清潔，以減少微生物污染的可能性。

3、無菌操作：制備營養(yǎng)肉湯時應(yīng)確保所有使用的工具、容器和試劑都是無菌的。避免用手直接接觸培養(yǎng)基。

4、高壓滅菌：制備好的營養(yǎng)肉湯應(yīng)經(jīng)過高壓滅菌處理，以殺死可能存在的細菌和其他微生物。

5、儲存條件：滅菌后的營養(yǎng)肉湯應(yīng)儲存在適當?shù)臈l件下，通常是在冷藏環(huán)境中。確保在有效期內(nèi)使用。

6、避免交叉污染：在使用營養(yǎng)肉湯時，應(yīng)避免與其他實驗材料或試劑發(fā)生交叉污染。例如，不要使用同一支移液管在不同類型的培養(yǎng)基之間轉(zhuǎn)移液體。

7、處理廢棄物：使用后的培養(yǎng)基廢棄物應(yīng)按照實驗室廢棄物處理規(guī)定進行妥善處理。

8、遵守實驗室規(guī)章制度：在制備和使用營養(yǎng)肉湯時，應(yīng)嚴格遵守實驗室的規(guī)章制度和安全操作規(guī)范。

三、應(yīng)用

營養(yǎng)肉湯(NB)可以用于抗菌塑料砧板抗菌性能的評價方法優(yōu)化及其應(yīng)用研究：

選擇常見的食品接觸材料制品“抗菌塑料砧板”為研究對象,主要探討了其抗菌性和抗菌耐久性相關(guān)的評價技術(shù)與方法,在此基礎(chǔ)上對市場上銷售的抗菌塑料砧板進行了合格率調(diào)查,相關(guān)結(jié)果總結(jié)如下:

1、首先針對食品接觸材料抗菌性能貼膜法(GB/T 31402-2015)中接種液在陰性對照和空白對照培養(yǎng)24 h后菌落回收出現(xiàn)明顯增殖這一現(xiàn)象,研究了接種液中營養(yǎng)肉湯濃度對貼膜法菌落回收的影響。結(jié)果顯示,試驗菌種為金黃色葡萄球菌和大腸桿菌時,菌液制備用營養(yǎng)肉湯(NB)的濃度比分別為1/500和1/1000,相比原國標法大腸桿菌的接種液濃度為1/500營養(yǎng)肉湯(1/500NB),本實驗改進的方法更能保障測試結(jié)果的準確。

2、分別采用原國標法及本實驗改進的國標法對20種抗菌塑料砧板進行抗菌性能評價,驗證改進方法的有效性。營養(yǎng)肉湯(NB)結(jié)果顯示,13種抗菌塑料砧對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌都有抗菌作用,抗菌率都>90%,其余7種抗菌率<90%為不合格產(chǎn)品,合格率僅為65%,這說明市售抗菌塑料砧板的抗菌合格率總體偏低,應(yīng)進一步加強管理,引導抗菌塑料砧板產(chǎn)業(yè)加強技術(shù)研發(fā),提高抗菌效果。營養(yǎng)肉湯(NB)數(shù)據(jù)表明抗菌效果與砧板銀離子濃度相關(guān),要實現(xiàn)90%以上抗菌率,銀離子濃度基本要達到25 mg/Kg以上,而當銀離子濃度>40 mg/Kg時,抗菌率均高于99.99%。此外,數(shù)據(jù)顯示相對于國標法,改進的方法更嚴格、準確,20種受試砧板對大腸桿菌的抗菌合格率為70%,而國標法對大腸桿菌的抗菌合格率為80%。

3、對市售的兩種納米銀抗菌塑料砧板用改進的國標法進行抗菌性能評價,結(jié)果表明,兩種納米銀抗菌塑料砧板對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌都具有抗菌效果,抗菌性能值都>3.00,但較低濕度下大部分的細菌會干燥死亡。當使用正常濃度的營養(yǎng)肉湯(NB)制備的菌懸液用于測試時,納米銀抗菌塑料砧板表現(xiàn)出弱的甚至無抗菌作用。表皮葡萄球菌,沙門氏菌,沙雷氏菌和單核細胞增生李斯特菌等4種食源細菌接種實驗結(jié)果表明,納米銀抗菌塑料砧板在正常濃度NB和高濕度下抗菌效果并不理想。與實際的食物使用情況相比,標準貼膜試驗可能會高估納米銀抗菌塑料砧板的抗菌效果。

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