賽默飛QuantStudio® 5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)技術(shù)介紹

一、設(shè)備概述

賽默飛（Thermo Fisher Scientific）QuantStudio® 5實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)是一款面向科研及中高通量應(yīng)用的分子生物學(xué)分析儀器，適用于基因表達(dá)分析、微生物檢測(cè)、SNP基因分型、拷貝數(shù)變異（CNV）分析、病毒載量測(cè)定等實(shí)驗(yàn)需求。該系統(tǒng)集成了光學(xué)檢測(cè)、溫控系統(tǒng)及智能化軟件平臺(tái)，可對(duì)實(shí)時(shí)熒光信號(hào)進(jìn)行精確檢測(cè)與分析。

QuantStudio® 5系統(tǒng)具備96孔標(biāo)準(zhǔn)樣本通量配置（0.2 mL標(biāo)準(zhǔn)耗材），適合多種實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及動(dòng)態(tài)范圍要求，并具備較高的數(shù)據(jù)一致性與可重復(fù)性。

二、技術(shù)參數(shù)與核心性能

1. 通量與支持耗材

QuantStudio® 5 PCR儀支持以下耗材配置：

• 96孔標(biāo)準(zhǔn)板（0.2 mL）

• 八聯(lián)管及0.2 mL單管（需配合校準(zhǔn)耗材使用）

• 兼容無裙邊、半裙邊與全裙邊PCR板

通過熱蓋壓板自動(dòng)調(diào)節(jié)功能，系統(tǒng)可兼容不同高度與類型的耗材，適用于常見qPCR試劑盒或自配反應(yīng)體系。

2. 光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)

該系統(tǒng)采用多通道獨(dú)立光源設(shè)計(jì)，可實(shí)現(xiàn)以下性能：

• 檢測(cè)通道數(shù)量：最多6色（包括FAM、VIC、ROX、SYBR Green、TAMRA、Cy5等）

• 檢測(cè)原理：基于LED激發(fā)和CCD相機(jī)檢測(cè)

• 靈敏度：可檢測(cè)低至1拷貝的模板（取決于反應(yīng)體系）

• 光學(xué)濾光片組：預(yù)設(shè)并自動(dòng)識(shí)別，減少人工設(shè)定誤差

光學(xué)系統(tǒng)具有較強(qiáng)的信號(hào)分辨能力，適用于多重PCR實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

3. 溫控性能

• 升溫速率：最高可達(dá)4.25°C/s

• 降溫速率：最高可達(dá)3.6°C/s

• 溫度均一性：±0.4°C（30秒內(nèi)，90個(gè)孔）

• 溫控模塊：采用精密Peltier熱電控溫單元

上述溫控精度有助于確保反應(yīng)的穩(wěn)定性和擴(kuò)增曲線的準(zhǔn)確性，尤其適用于SNP或微小表達(dá)差異的精細(xì)分析。

4. 軟件功能與數(shù)據(jù)輸出

QuantStudio® Design and Analysis軟件支持以下主要功能：

• 實(shí)時(shí)熒光數(shù)據(jù)采集與分析

• 自動(dòng)閾值計(jì)算與基線校正

• 多重?cái)U(kuò)增曲線展示與分析

• ΔΔCt法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法、等位基因判定分析

• 數(shù)據(jù)輸出格式支持.csv、.xls、.txt等標(biāo)準(zhǔn)形式，便于后續(xù)統(tǒng)計(jì)分析

系統(tǒng)亦可實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)程控制與云端數(shù)據(jù)同步（通過Thermo Fisher Connect平臺(tái)），便于實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)統(tǒng)一管理與多站點(diǎn)協(xié)作。

三、應(yīng)用場(chǎng)景

QuantStudio® 5廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、農(nóng)業(yè)、生物制藥、環(huán)境檢測(cè)與食品安全等多個(gè)領(lǐng)域，典型應(yīng)用包括：

1. 基因表達(dá)定量分析：結(jié)合SYBR Green或TaqMan探針技術(shù)，用于篩選差異表達(dá)基因，或在藥物反應(yīng)機(jī)制研究中追蹤轉(zhuǎn)錄響應(yīng)。

2. 病原檢測(cè)與載量評(píng)估：適用于病毒RNA/DNA的定量檢測(cè)，如新冠病毒、HBV、HCV等，常見于臨床前研究與疫病篩查。

3. SNP和CNV分析：結(jié)合探針法進(jìn)行等位基因分型和拷貝數(shù)變異監(jiān)測(cè)，適用于群體遺傳學(xué)研究或個(gè)體精準(zhǔn)分析。

4. 轉(zhuǎn)基因檢測(cè)與食品溯源：檢測(cè)食品或原材料中潛在的外源基因或污染。

5. 基因編輯驗(yàn)證：配合CRISPR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行靶點(diǎn)驗(yàn)證、突變位點(diǎn)檢測(cè)等操作。

四、系統(tǒng)兼容性與操作便捷性

QuantStudio® 5支持Windows操作系統(tǒng)環(huán)境，可與多種主流實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)（LIMS）兼容。用戶界面友好，支持中英文語(yǔ)言切換，操作流程符合初學(xué)者到經(jīng)驗(yàn)用戶的不同使用習(xí)慣。

系統(tǒng)提供操作向?qū)Чδ?，包含?/p>

• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)模板（相對(duì)定量、絕對(duì)定量、基因分型、熔解曲線等）

• 實(shí)時(shí)運(yùn)行監(jiān)控

• 自動(dòng)報(bào)警與校準(zhǔn)提醒

• 多用戶權(quán)限管理

五、維護(hù)與校準(zhǔn)

該系統(tǒng)配套自動(dòng)光學(xué)校準(zhǔn)與溫控模塊校準(zhǔn)程序。用戶可根據(jù)日常使用頻率設(shè)置校準(zhǔn)周期，系統(tǒng)在檢測(cè)到漂移時(shí)自動(dòng)提示。光源壽命長(zhǎng)達(dá)10萬(wàn)小時(shí)以上，維護(hù)成本較低。

此外，儀器配有USB和以太網(wǎng)口，便于本地備份與遠(yuǎn)程技術(shù)支持。固件更新可在線或離線完成，以確保功能持續(xù)更新與穩(wěn)定運(yùn)行。

六、系統(tǒng)組成與安裝要求

系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)配置包括：

• 主機(jī)設(shè)備

• 校準(zhǔn)板與96孔熱循環(huán)模塊

• 控制與分析軟件安裝包

• 使用說明文檔與合規(guī)認(rèn)證資料（CE、ISO）

安裝環(huán)境要求如下：

• 電源：100–240V AC，50/60Hz，最大功率500W

• 操作溫度范圍：15–30°C，濕度20–80%（非冷凝）

• 建議配置實(shí)驗(yàn)臺(tái)穩(wěn)定且防震，避免陽(yáng)光直射及強(qiáng)磁干擾

七、優(yōu)勢(shì)對(duì)比與選型建議

在中小通量實(shí)時(shí)PCR應(yīng)用中，QuantStudio® 5相較于早期Applied Biosystems®系列或Bio-Rad CFX系列，在用戶交互、光學(xué)通道組合、遠(yuǎn)程控制能力方面具備一定改進(jìn)。其靈活的配件拓展能力及標(biāo)準(zhǔn)化軟件界面，使其成為高頻次實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景中的可靠方案。

如用戶面向更高通量（384孔板）或數(shù)字PCR需求，可進(jìn)一步考慮QuantStudio® 6/7 Flex或QuantStudio® Absolute系列。

八、小結(jié)

Thermo Fisher QuantStudio® 5實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)以其實(shí)用的功能、合理的性能參數(shù)與良好的數(shù)據(jù)輸出兼容性，在科研與日常分子實(shí)驗(yàn)工作中具有廣泛適用性。其模塊化設(shè)計(jì)與便捷軟件平臺(tái)可有效支持用戶完成復(fù)雜的PCR實(shí)驗(yàn)流程，助力實(shí)驗(yàn)室提升分析效率與結(jié)果的可重復(fù)性。