什么是人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A）elisa試劑盒說明

什么是人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A）elisa試劑盒說明　　

        實(shí)驗(yàn)原理
　　
　　 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A）水平。用純化的人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A），再與HRP標(biāo)記的肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A）濃度。
　　
　　液體類標(biāo)本：
　　
　　標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。
　　
　　血清：
　　
　　室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
　　
　　血漿：
　　
　　應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％（v/v）抗凝劑（0.1M檸檬酸鈉或1%heparin或2.0%EDTA.Na2）混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
　　
　　組織標(biāo)本：
　　
　　切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。