沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)原理與注意事項(xiàng)及應(yīng)用！

一、背景

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基又名SDA培養(yǎng)基或者沙氏培養(yǎng)基，英文名字是Sabouraud Dextrose Agar，是通用型的真菌培養(yǎng)基，屬于營養(yǎng)培養(yǎng)基中的一種，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基屬于一種改性的沙氏瓊脂，主要用來培養(yǎng)和區(qū)分真菌，并且這種培養(yǎng)基一般會和抗生素一起使用，通過使用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基可以將真菌和細(xì)菌材料中的病原體真菌分離出來。沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基主要就是用來鑒別和培養(yǎng)真菌，尤其是那些皮膚真菌。有些也會用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈區(qū)沉降菌和浮游菌中真菌的鑒定。

二、實(shí)驗(yàn)原理

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基含糖量比較高，并且其PH值比較低，這種特性非常有利于真菌的生長，并且可以有效的抑制細(xì)菌的生長。真菌學(xué)蛋白胨提供氮源、硫源和礦物質(zhì)及維生素。通過沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)生長出的真菌可以保留其典型的形態(tài)學(xué)特征，也因此可以通過形態(tài)學(xué)特征的不同對菌種進(jìn)行鑒定。

三、注意事項(xiàng)

因?yàn)榕囵B(yǎng)時會產(chǎn)生大量的孢子，它們極易散播在空氣中，對于實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境造成污染，因此對于使用過后的培養(yǎng)基一定要很好的回收和看管，在丟棄之前一定要先放入121度的高溫中進(jìn)行殺菌，經(jīng)過1小時的高溫殺菌之后才可以丟棄。

四、應(yīng)用

用于林生地霉培養(yǎng)基形態(tài)學(xué)觀察及生理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究：

通過對林生地霉血液分離株在五種不同培養(yǎng)基上的培養(yǎng)情況進(jìn)行觀察,以便尋找出更適合其生長的培養(yǎng)基;另一方面,通過一些常規(guī)的生理學(xué)實(shí)驗(yàn),初步了解林生地霉的一些生理學(xué)特征,為實(shí)驗(yàn)室的鑒定工作提供幫助,對臨床林生地霉感染的診斷具有重要意義。

方法：

1、五種培養(yǎng)基上的形態(tài)學(xué)觀察：（1）平皿培養(yǎng)的大體菌落觀察取林生地霉血液株置常溫下復(fù)蘇,3天后轉(zhuǎn)種于沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基（SDA）、馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）、麥芽汁瓊脂（MEA）、玉米粉瓊脂（CMA）和察氏瓊脂（CZA）平皿培養(yǎng)基上,分別置37℃和27℃溫箱培養(yǎng)2周,每日測量并記錄菌落直徑,觀察菌落形態(tài),最后以生長時間和菌落平均直徑繪成生長曲線。

（2）平皿培養(yǎng)的光鏡下觀察每日分別挑取37℃和27℃的五種培養(yǎng)基的菌落標(biāo)本置于載玻片上,經(jīng)乳酸酚棉藍(lán)染色,光鏡下觀察。

（3）小培養(yǎng)（鋼圈法）將林生地霉血液株分別點(diǎn)種于以上五種培養(yǎng)基的小培養(yǎng)上,37℃和27℃溫箱培養(yǎng),每天觀察菌絲生長、產(chǎn)孢情況,共2周。

2、生理學(xué)實(shí)驗(yàn)：（1）芽管試驗(yàn)挑取菌落置于0.5ml人血清中,置37℃溫箱孵育3h,觀察是否有芽管形成。

（2）厚膜孢子試驗(yàn)將試驗(yàn)菌株接種于玉米-吐溫80瓊脂培養(yǎng)基上,室溫孵育24-72小時,觀察厚膜孢子形成情況。

（3）硝酸鹽同化試驗(yàn)將菌落配置成菌懸液,加入到無氮源培養(yǎng)基中,分別加少量硝酸鉀及蛋白胨于培養(yǎng)基表面。室溫培養(yǎng),每日觀察。

（4）耐受試驗(yàn)將菌落配置成菌懸液,分別接種于含有和不含的沙氏瓊脂培養(yǎng)基上。室溫培養(yǎng)3天,觀察結(jié)果。

（5）尿素酶試驗(yàn)將菌落接種于尿素瓊脂培養(yǎng)基上,室溫培養(yǎng)1周,觀察培養(yǎng)基變色情況。

（6）糖發(fā)酵試驗(yàn)將菌落接種于含有杜氏管的各種糖發(fā)酵培養(yǎng)基中,37℃孵育,每日觀察發(fā)酵情況。

（7）API 20C酵母系統(tǒng)利用API 20C AUX試劑盒檢測,判讀反應(yīng)結(jié)果,將結(jié)果編號對照API 20C AUX編碼冊,待結(jié)果。

結(jié)果：

五種培養(yǎng)基上的形態(tài)學(xué)觀察：（1）平皿培養(yǎng)的大體菌落觀察1.1.1繪制的生長曲線在SDA、PDA和MEA三種培養(yǎng)基上,林生地霉于培養(yǎng)的第1周生長較快,其生長速度與時間呈正比;在兩種溫度下,27℃較37℃生長快。在CMA和CZA兩種培養(yǎng)基上生長速度始終較慢,27℃較37℃生長稍快。（2）菌落直徑同種培養(yǎng)基在不同溫度下其菌落直徑的比較結(jié)果顯示,于生長7天和14天時,各培養(yǎng)基在27℃的菌落直徑均比37℃菌落直徑大,有顯著性差異。

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