ELISA（酶聯免疫吸附測定）樣本不顯色解讀

ELISA（酶聯免疫吸附測定）中，如果標準品顯色但樣本不顯色，可能由以下幾個原因造成：

1. 樣本保存或處理不當：如果樣本在保存或處理過程中發(fā)生了降解，或者樣本中待檢測的抗原濃度過低，都可能導致樣本不顯色。

2. 抗體特異性或濃度問題：使用的捕獲抗體和檢測抗體可能與樣本中的抗原不匹配，或者抗體濃度不足，導致特異性結合不充分。

3. 孵育條件不適宜：孵育溫度、時間或緩沖液條件不適當，可能影響抗原抗體的結合效率。

4. 封閉不充分或封閉液問題：封閉步驟如果未充分進行，可能會導致非特異性結合增加，從而掩蓋了特異性信號。

5. 顯色時間不足：標準品顯色時間可能比樣本所需時間長，如果樣本孔的顯色時間不夠，也可能導致不顯色。

6. 終止液問題：加入終止液后，如果終止液不正確，可能提前終止了顯色反應，導致樣本孔不顯色。

7. 顯色劑保存不當：如果顯色劑如TMB在使用前已經變色或氧化，會影響最終的顯色效果。

8. 儀器讀數問題：酶標儀的波長設置、濾光片選擇或儀器本身的問題，可能影響到樣本孔的讀數。

解決方法：

1. 檢查樣本保存和處理過程，確保樣本未降解且抗原濃度足夠。

2. 驗證抗體的特異性及濃度，必要時更換抗體。

3. 確保孵育條件符合說明書要求。

4. 仔細執(zhí)行封閉步驟，如果封閉不充分，嘗試增加封閉時間或調整封閉液的濃度。

5. 確認顯色時間，確保樣本孔達到顯色的峰值。

6. 使用正確的終止液，并在加入終止液后立即讀數。

7. 檢查顯色劑的保存條件，確保其未被氧化。

8. 核對酶標儀的設置，確保波長和濾光片選擇正確，并考慮儀器校準。

9. 如果是新試劑或新操作，可以嘗試對照標準品操作，看是否能重現顯色，從而排除操作步驟中的問題。

通過上述步驟，可以排查并解決樣本不顯色的問題。