BHK-21倉(cāng)鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)條件與方法
BHK-21細(xì)胞的培養(yǎng)需要特定的條件以確保其健康生長(zhǎng):
培養(yǎng)基:通常使用含有10%胎牛血清(FBS)DMEM或RPMI-1640培養(yǎng)基。
溫度與氣體環(huán)境:維持在37℃,5% CO2的培養(yǎng)箱中。
傳代方法:當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí),需進(jìn)行傳代。具體步驟包括棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,隨后加入消化液(如0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA)于37℃消化1-2分鐘,直至細(xì)胞大部分變圓并脫落,最后加入含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使其脫落,離心后重懸并分配至新的培養(yǎng)瓶中。
在成功傳代后,BHK-21細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)需密切觀察。通常,細(xì)胞在傳代后24小時(shí)內(nèi)會(huì)重新貼壁,并在48-72小時(shí)內(nèi)進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。若細(xì)胞貼壁不良或生長(zhǎng)緩慢,可能需檢查培養(yǎng)基成分是否失效,或培養(yǎng)箱的CO2濃度及濕度是否穩(wěn)定。
對(duì)于長(zhǎng)期培養(yǎng)的BHK-21細(xì)胞,建議定期檢測(cè)支原體污染,并避免頻繁更換培養(yǎng)基批次,以減少細(xì)胞適應(yīng)性的波動(dòng)。此外,凍存細(xì)胞時(shí)推薦使用含10% DMSO的凍存液,以緩慢降溫(如程序凍存盒)的方式保存于液氮中,確保細(xì)胞復(fù)蘇后的存活率。
在實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中,BHK-21細(xì)胞常用于病毒增殖、重組蛋白表達(dá)等研究。為提高外源基因的轉(zhuǎn)染效率,可采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或電穿孔法,但需優(yōu)化條件以避免細(xì)胞毒性。若用于病毒包裝,需注意細(xì)胞密度控制在60%-70%,以確保感染效率。
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