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凝膠滲透色譜的核心原理是基于分子尺寸大小的分離機(jī)制。它使用具有多孔結(jié)構(gòu)的凝膠作為固定相，當(dāng)樣品溶液通過(guò)色譜柱時(shí)，不同分子量的高分子化合物會(huì)因體積差異而表現(xiàn)出不同的滲透能力。較大的分子無(wú)法進(jìn)入凝膠顆粒的小孔，只能沿著顆粒間的間隙流動(dòng)，因此路徑較短、流速較快；而較小的分子可以滲入更多毛孔內(nèi)部，導(dǎo)致其流動(dòng)路徑更長(zhǎng)、速度更慢。這種差異使得大分子先被洗脫出來(lái)，小分子后出峰，從而實(shí)現(xiàn)按分子量從大到小的順序依次分離。
分配與流動(dòng)過(guò)程：樣品溶解于適當(dāng)溶劑后注入色譜柱，在流動(dòng)相(通常為有機(jī)溶劑)推動(dòng)下穿過(guò)填料。由于不同大小的分子在多孔介質(zhì)中的擴(kuò)散深度和滯留時(shí)間不同，形成與分子體積相關(guān)的保留時(shí)間分布。這一特性特別適用于分析聚合物、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的分子量分布及結(jié)構(gòu)特征。
校正與定量分析：通過(guò)已知標(biāo)準(zhǔn)品建立校準(zhǔn)曲線，可將保留時(shí)間轉(zhuǎn)換為對(duì)應(yīng)的分子量數(shù)值，進(jìn)而準(zhǔn)確測(cè)定樣品中各組分的含量比例。該技術(shù)還支持普適校正方法，提高了跨實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的可比性。
凝膠滲透色譜(GPC)的測(cè)定步驟：
1.前期準(zhǔn)備與樣品溶解
-選擇合適溶劑：根據(jù)樣品性質(zhì)選取能溶解它的流動(dòng)相，如THF、DMSO或水相等；
-配制溶液：將適量樣品溶于所選溶劑中，確保均勻無(wú)顆粒物殘留，必要時(shí)進(jìn)行過(guò)濾處理以避免堵塞色譜柱。
2.儀器開(kāi)機(jī)預(yù)熱：?jiǎn)?dòng)設(shè)備后等待系統(tǒng)穩(wěn)定，包括泵、檢測(cè)器等組件達(dá)到工作狀態(tài)。
3.基線校準(zhǔn)：注入空白溶劑作為參比，建立穩(wěn)定的基線信號(hào)，用于后續(xù)數(shù)據(jù)分析時(shí)的扣除背景干擾。
4.進(jìn)樣分析：通過(guò)自動(dòng)進(jìn)樣器或手動(dòng)方式將處理好的樣品注入色譜柱頂端，記錄時(shí)間并開(kāi)始數(shù)據(jù)采集。
5.數(shù)據(jù)采集與處理：利用軟件實(shí)時(shí)監(jiān)控流出曲線，計(jì)算重均分子量(Mw)、數(shù)均分子量(Mn)、Z均分子量(M)及分散系數(shù)(PDI)，生成分子量分布圖。
6.清洗維護(hù)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用高純度溶劑沖洗管路和柱子，防止殘留物影響下次實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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